產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。其蛋白結(jié)構(gòu)包含5’→3’聚合酶結(jié)構(gòu)域和經(jīng)過改造的3’→5’外切酶結(jié)構(gòu)域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達(dá)到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了獨特的延伸因子，擴(kuò)增速度達(dá)到15 sec/kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化后的酶緩沖液，添加了PCR增強(qiáng)組分，使得該酶具有極強(qiáng)的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性，非常適合復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
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編號 |
組分 |
產(chǎn)品編碼/規(guī)格 |
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10135ES10 （10 U） |
10135ES60 （100 U） |
10135ES76 （500 U） |
10135ES80 （1000 U） |
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10135-A |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL） |
5 μL |
50 μL |
250 μL |
2×250 μL |
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10135-B |
2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
300 μL |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
PCR反應(yīng)體系（推薦冰上配制）
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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H2O |
to 50 μL |
- |
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2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
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DNA模板 |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL?？梢栽?.5-2 U/50 μL之間進(jìn)行優(yōu)化，請勿超過2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應(yīng)體系中。
4）Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。
6）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
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模板種類 |
擴(kuò)增片段1 kb-20 kb |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)?；虿《綝NA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
98℃ |
0.5-3 min |
1 |
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變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
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終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用98℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間推薦如下：質(zhì)粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為30 sec/kb，根據(jù)實際情況可延長至40 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，產(chǎn)物直接用于克隆，請使用平末端連接載體。
應(yīng)用實例
圖1： Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶擴(kuò)增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可實現(xiàn)高特異性、高產(chǎn)量擴(kuò)增。模板：擬南芥基因組DNA，50 ng/50 μL；退火溫度：60℃；延伸時間：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10136ES03/08/25 |
1/5/25 mL |
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10907ES20 |
20 T |
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10908ES20 |
20 T |
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10909ES20 |
20 T |
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10910ES20 |
20 T |
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10911ES25/62 |
25/5×25 T |
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10912ES10/50 |
10/5×10 T |
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11003ES10 |
10 T |
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11004ES10 |
10 T |
HB210923
