產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的熱啟動因子，極大提高了擴(kuò)增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增目的片段的長度可長達(dá)10 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了時間。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer后進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克隆；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）解凍后Master Mix可能出現(xiàn)晶體沉淀，使用前務(wù)必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。
2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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DNA模板 |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix |
25 μL |
1× |
【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預(yù)混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
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模板種類 |
擴(kuò)增片段1 kb-10 kb |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)?；虿《綝NA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
|
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終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
退火 |
60℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
梯度溫度退火程序（難擴(kuò)增基因推薦程序）:
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步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
15，每個循環(huán)降低1℃ |
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梯度退火 |
70-55℃ |
20 sec |
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|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
20 |
|
正常退火 |
55℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1）預(yù)變性溫度和時間：推薦溫度：98℃，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦溫度：72℃。時間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)：
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程序類型 |
兩步法 |
三步法 |
梯度退火 |
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速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
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特異性 |
高 |
中等 |
高 |
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PCR產(chǎn)量 |
中等 |
最高 |
中等 |
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檢出率 |
高 |
中等 |
高 |
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10148ES60/76/80 |
100/500/1000 U |
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10909ES20 |
20 T |
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10910ES20 |
20 T |
|
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10911ES20 |
20 T |
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10912ES10 |
10 T |
|
|
11003ES10 |
10 T |
|
|
11004ES10 |
10 T |
HB210831
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