產(chǎn)品描述

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace^® High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶，具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了實(shí)驗(yàn)操作步驟，減少了人為誤差，提高了實(shí)驗(yàn)通量和結(jié)果的重復(fù)性。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer 后進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
 

產(chǎn)品應(yīng)用

基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。
 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。有效期2年。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）

組分	體積	終濃度
ddH2O	to 50 μL	-
DNA模板	適量	-
Primer正向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Primer反向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
2× Hieff Canace® PCR Master Mix	25 μL	1×

【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預(yù)混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。
5）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：

模板種類	擴(kuò)增片段1 kb-20 kb
基因組DNA	50 ng-200 ng
質(zhì)?；虿《綝NA	10 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)

PCR擴(kuò)增程序設(shè)置

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	98℃	0.5-3 min	1
變性	98℃	10 sec	30-35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	15-30 sec/kb
終延伸	72℃	5 min	1

【注】：
1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用98℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間推薦如下：質(zhì)粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為30 sec/kb，根據(jù)實(shí)際情況可延長至40 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，產(chǎn)物直接用于克隆，請使用平末端連接載體。
 

應(yīng)用實(shí)例

圖1： Hieff Canace® 高保真PCR預(yù)混液擴(kuò)增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可實(shí)現(xiàn)高特異性、高產(chǎn)量擴(kuò)增。模板：擬南芥基因組DNA，50 ng/50 μL；退火溫度：60℃；延伸時間：30 sec/kb。M：1 kb ladder； 1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10135ES60/76/80	100/500/1000 U
零背景TOPO-TA克隆試劑盒HOT	10907ES20	20 T
零背景TOPO-TA克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點(diǎn)）	10908ES20	20 T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT	10909ES20	20 T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點(diǎn)）	10910ES20	20 T
一步法快速克隆試劑盒HOT	10911ES20	20 T
多片段一步法快速克隆試劑盒HOT	10912ES10	10 T
定點(diǎn)突變試劑盒HOT	11003ES10	10 T
多點(diǎn)突變試劑盒HOT	11004ES10	10 T

 HB210831