內(nèi)參即內(nèi)部參照（Internal Control），類似于熒光定量實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參基因，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們?cè)诓煌M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，常用它作為檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平變化時(shí)來(lái)做參照物。

1. 內(nèi)參抗體的功能：

（1）檢測(cè)整個(gè)WB流程是否正常

（2）檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物是否正確

（3）比較表達(dá)產(chǎn)物微量的相對(duì)變化

（4）評(píng)價(jià)各個(gè)上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致

2. 內(nèi)參抗體的選擇：

（1） 樣本種屬來(lái)源

l 哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、NaK、Atpase等。

l 植物來(lái)源實(shí)驗(yàn)樣本，則可以選擇plant actin、Rubisco等。

l 根據(jù)來(lái)源樣本選擇不同的內(nèi)參，是WB實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。也可參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

（2）目的蛋白分子量

選擇內(nèi)參抗體時(shí)，應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小。通常應(yīng)該保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量為45 KD，此時(shí)不適宜選擇β-actin（43 KD）作為內(nèi)參，可以考慮選擇GAPDH或者β-tubulin作為內(nèi)參。