83倍Taq高保真預(yù)混液2×Hieff Canace? Plus PCR Master Mix(With Dye)
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體，可簡(jiǎn)便地進(jìn)行高特異性的Hot Start PCR。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度可長(zhǎng)達(dá)13 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了時(shí)間。本產(chǎn)品中含有電泳指示染料，PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60 |
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規(guī)格 |
100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
- 推薦PCR反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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RNase-free ddH2O |
to 50 μL |
- |
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DNA模板*** |
適量 |
- |
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Forward Primer (10 μM)** |
2 μL |
0.4 μM |
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Reverse Primer (10 μM)** |
2 μL |
0.4 μM |
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2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)* |
25 μL |
1× |
*在終濃度1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
** PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.4 μM。
***不同模板的推薦使用量（25 μL反應(yīng)體系）:
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模板種類 |
擴(kuò)增片段1 kb-10 kb |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)?；虿《?/font>DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-2.5 μL（不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10） |
- 推薦PCR擴(kuò)增程序
- 兩步法程序(優(yōu)先推薦)
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
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變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
2）三步法程序(常規(guī)程序)
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性* |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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退火** |
60℃ |
20 sec |
|
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延伸*** |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
*預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦溫度：98°C，時(shí)間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
**退火溫度和時(shí)間：推薦溫度：60°C，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長(zhǎng)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
***延伸溫度和時(shí)間：推薦溫度：72°C。時(shí)間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長(zhǎng)至60 sec/kb。
3）梯度溫度退火程序(難擴(kuò)增基因推薦程序)
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
15，每個(gè)循環(huán)降低1℃ |
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梯度退火 |
70-55℃ |
20 sec |
|
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
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|
變性 |
98℃ |
10 sec |
20 |
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正常退火 |
55℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
4）不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)
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程序類型 |
兩步法 |
三步法 |
梯度退火 |
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速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
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特異性 |
高 |
中等 |
高 |
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PCR產(chǎn)量 |
中等 |
最高 |
中等 |
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檢出率 |
高 |
中等 |
高 |
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
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