Hieff Canace^® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體，可簡便地進(jìn)行高特異性的Hot Start PCR，極大提高了擴(kuò)增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增目的片段的長度可長達(dá)13 kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化緩沖液，使得該酶適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品規(guī)格
		10153ES10（10 U）	10153ES60（100 U）	10153ES76（500 U）	10153ES80（1,000 U）
10153-A	Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	10 μL	100 μL	500 μL	500 μL×2
10153-B	2×Canace® Plus PCR buffer（含Mg2+，dNTPs）	300 μL	3×1 mL	15×1 mL	30×1 mL
10153-C	6×DNA Loading Buffer	120 μL	1 mL	6×1 ml	12×1 ml

 

產(chǎn)品應(yīng)用

基因克?。粡?fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。

 

活性定義

用活性化的大馬哈魚精子DNA為模板/引物，74°C，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20°C保存。有效期1年。

 

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

推薦PCR反應(yīng)體系

組分	體積	終濃度
ddH2O	to 50 μL	-
2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+，dNTPs)	25 μL	1×
DNA模板	適量	-
Primer正向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Primer反向 (10 μM)	2 μL	0.4 μM
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	1 μL	1 U/50 μL

【注】：1. 試劑使用：使用前要充分解凍混勻。

2. Mg2+終濃度：體系終濃度為2mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。

3. 高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。

4. 不同模板的推薦使用量（25 μL反應(yīng)體系）：

模板種類	擴(kuò)增片段1 kb-10 kb
基因組DNA	50 ng-200 ng
質(zhì)?；虿《綝NA	10 pg-20 ng
cDNA	1-2.5 μL（不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10）

PCR擴(kuò)增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。

 

兩步法程序（優(yōu)先推薦）：					三步法程序（常規(guī)程序）：
循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)		循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	98°C	3 min	1		預(yù)變性1	98°C	3 min	1
變性	98°C	10 sec	30-35		變性	98°C	10 sec	30-35
延伸	68°C	30 sec/kb			退火2	60°C	20 sec
終延伸	72°C	5 min	1		延伸3	72°C	30 sec/kb
					終延伸	72°C	5 min	1

                                                         

梯度溫度退火程序（難擴(kuò)增基因推薦程序）:					*不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)：
步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)		程序類型	兩步法	三步法	梯度退火
預(yù)變性	98°C	3 min	1		速度	最快	中等	慢
變性	98°C	10 sec	15，每個(gè)循環(huán)降低1℃		特異性	高	中等	高
梯度退火	70-55°C	20 sec			PCR產(chǎn)量	中等	最高	中等
延伸	72°C	30 sec/kb			檢出率	高	中等	高
變性	98°C	10 sec	20
正常退火	55°C	20 sec
延伸	72°C	30 sec/kb
終延伸	72°C	5 min	1

【注】：1. 預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦溫度：98°C，時(shí)間：3 min，高GC含量模板5-10 min。

2. 退火溫度和時(shí)間：推薦溫度：60°C，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。

3. 延伸溫度和時(shí)間：推薦溫度：72°C。時(shí)間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長至60 sec/kb。 

 

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶預(yù)混液	10154ES03/08	1 mL/5×1 mL
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10148ES60/76/80	100 U/500 U/1000 U
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液HOT	10149ES03/08	1 mL/5×1 mL
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT	10909ES20	20 T
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點(diǎn)）	10910ES20	20 T
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒HOT	10911ES20	20 T
Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒HOT	10912ES10	10 T
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定點(diǎn)突變試劑盒HOT	11003ES10	10 T
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多點(diǎn)突變試劑盒HOT	11004ES10	10 T

 

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