Hieff NGS? Fast-Pace DNA Ligation Module 快速DNA連接模塊
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module是針對(duì)Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)文庫(kù)構(gòu)建專業(yè)設(shè)計(jì)的DNA連接模塊。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina®測(cè)序平臺(tái)適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)。本產(chǎn)品已與Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫(kù)構(gòu)建，通過(guò)Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量與功能驗(yàn)證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。
產(chǎn)品組分
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產(chǎn)品編號(hào) |
組分名稱 |
規(guī)格 |
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12607ES24 |
12607ES96 |
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12607-A |
Fast-Pace T4 DNA Ligase |
120 μL |
480 μL |
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12607-B |
5×Fast-Pace Ligation Buffer |
480 μL |
960×2 μL |
測(cè)序驗(yàn)證
本品與Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫(kù)構(gòu)建，通過(guò)Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，效期一年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法
1. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。Adapter用量過(guò)高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。表1列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表1.500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
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Input DNA |
Adapter : Input DNA摩爾比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩爾比 |
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500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
|
250 ng |
40:1 |
10 ng |
200:1 |
|
100 ng |
100:1 |
1 ng |
200:1 |
|
50 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長(zhǎng)度（bp）]。
2. 目前主流的合并法DNA建庫(kù)試劑盒，其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，并渦旋混勻幾秒鐘，瞬離后至于20℃，反應(yīng)15分鐘即可。
表2.Adapter Ligation體系
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名稱 |
體積（μL） |
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dA-tailed DNA |
60 |
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5×Fast-Pace Ligation Buffer |
20* |
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Fast-Pace T4 DNA Ligase |
5 |
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DNA Adapter |
X** |
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dd2O |
To 100 |
【注】：*對(duì)于Ligation Enhancer，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。
**根據(jù)自身需求加入適量的接頭。
【接頭添加計(jì)算舉例】：當(dāng)Input DNA為100 ng，Input DNA長(zhǎng)度為300 bp時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？
第一步，計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長(zhǎng)度（bp）]；
Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)注意事項(xiàng)三表2查詢接頭添加比例；
根據(jù)表2，查得Input DNA 100ng時(shí)接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；
接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
綜上，接頭可添加3.4 μL，加1.6 μL水補(bǔ)齊至5 μL。（注：接頭最大加入體積不超過(guò)5 μL）
相關(guān)產(chǎn)品
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建庫(kù)試劑盒 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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Hieff NGS® MaxUp Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® |
12301ES08/24/96 |
8/24/96 T |
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12200ES24/96 |
24/96T |
|
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12201ES24/96 |
24/96T |
|
|
12203ES24/96 |
24/96 T |
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12206ES08/24/96 |
8/24/96 T |
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文庫(kù)構(gòu)建磁珠 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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12599ES08/56 |
5/60 mL |
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12600ES08/56 |
5/60 mL |
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|
Hieff NGS® DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative） |
12601ES08/56 |
5/60 mL |
|
12603ES24/96 |
24/96 T |
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建庫(kù)接頭 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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12615ES04/16 |
12×4/12×16 T |
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12616ES04/16 |
12×4/12×16 T |
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12617ES04/16 |
12×4/12×16 T |
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12618ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12610ES96 |
96 T |
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建庫(kù)模塊 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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12607ES24/96 |
24/96 T |
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12608ES24/96 |
24/96 T |
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2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification |
12621ES03/08 |
1/5×1mL |
|
Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit |
12250ES24/96 |
24/96 T |
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文庫(kù)定量 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix |
12302ES05 |
500 T |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®,DNA Standard (1-6) |
12307ES09 |
6×96 μL |
|
12640ES60/76 |
100/500 T |
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多重PCR |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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Hieff® Multiplex PCR Kit |
12279ES50/76 |
100/500 T |
|
Hieff® Multiplex PCR Master Mix |
12280ES50/76 |
50 /200 T |
HB210810
