——Protein A /G 瓊脂糖或磁珠
產(chǎn)品介紹
Protein A、Protein G是最常應用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。 Protein A/G瓊脂糖或磁珠將Protein A、G共價偶聯(lián)到介質(zhì)表面，具有結(jié)合能力更強、結(jié)合范圍更廣、實用性更高的特點。
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Protein A/G 4FF Agarose |
Protein A/G MagBeads |
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基質(zhì) |
高度交聯(lián)4%瓊脂糖微球 |
聚合物磁性微球 |
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填料粒徑 |
45-165 µm |
1 µm |
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載量 |
>20 mg 人IgG/mL |
>50 µg 人IgG/mg |
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優(yōu)勢 |
簡單易用，無需輔助設備 |
操作簡單 |
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孔徑大，結(jié)合力強 |
直徑小，動力學好 |
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靶蛋白獲取量高 |
表面光滑，beads吸附很少，背景低，抗體消耗少 |
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缺點 |
多孔易吸附（需要做pre-clear) |
配套磁力架使用方便 |
產(chǎn)品應用
1.純化抗體：一步純化即可從血清或腹水樣品中分離出高純度的抗體。
2.免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）：通過對某蛋白質(zhì)的富集，研究該蛋白的特性（如翻譯后修飾等）。
3.免疫共沉淀Co-IP(co-Immunoprecipitation)：通過對某蛋白質(zhì)的富集，研究與其結(jié)合的其他蛋白（即蛋白-蛋白相互作用、蛋白復合物等）。
操作流程
實用案例
1、Protein A/G 4FF Agarose純化兔血清中的抗體。
圖1 Protein A/G 4FF Agarose純化抗體結(jié)果電泳圖
2、Protein A/G 4FF Agarose用于COIP: 針對p65和細胞周期蛋白依賴性激酶9（CDK9）的特異性抗體對提取的總細胞蛋白進行免疫沉淀分析。
Fig 2. Immunoprecipitants were then subjected to western blot analysis using specific antibodies against CDK9 and p65.
常見問題
1、Co-IP背景較深或有雜帶？
① 固相基質(zhì)的非特異性結(jié)合，對瓊脂糖微球做pre clear或者更換磁珠。
② 抗體結(jié)合非特異的蛋白，可設置對照排除非特異性條帶。
③ 洗滌不當造成雜帶，可優(yōu)化緩沖液。
2、靶蛋白為什么沒有條帶？
① 沒有添加抑制劑或裂解液不合適，導致蛋白構(gòu)象改變不能結(jié)合或者降解。
② 餌蛋白較難洗脫，換成高強度的洗脫緩沖液。
③ 選用的抗體不合適，建議IP驗證過的抗體，并優(yōu)化下抗體用量。
④ 蛋白間為弱相互作用，或者相互作用依賴翻譯后修飾。
3、Input條帶清晰，
① 餌蛋白X和靶蛋白Y的相互作用本身比較弱。
② 餌蛋白X并不是靶蛋白Y的唯一，只部分Y與X互作；可以嘗試反向拉，比如用Y去拉X，可能效果比較好。
4、我的蛋白和抗體重鏈分子量很接近，怎樣減少抗體干擾？
① IP/WB一抗使用不同種屬來源，選擇與IP抗體種屬無交叉反應的二抗。
② 特殊二抗：比如僅識別重鏈或者輕鏈的二抗，或者僅識別天然抗體的二抗。
③ 直接源頭遏制：將抗體交聯(lián)到固相基質(zhì)或protein A/G上，避免洗脫干擾。
5、瓊脂糖難離心，容易吸上來一點，怎么辦？
① 使用帶濾膜的離心柱，下部有接樣管，瓊脂糖完全截留在濾膜上
② 換成磁珠
6、我的目的蛋白因為沒有對應的特異性抗體而無法進行免疫沉淀，怎么辦？
① 若此蛋白帶標簽，可選擇針對此蛋白的標簽抗體來進行免疫沉淀。
訂購信息
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格（mL） |
價格（元） |
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36403ES03/05/08/25/60 |
1/2/5/25/100 |
278/538/878/2886/7426 |
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36404ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
978/3186/8726 |
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36417ES03/08 |
1/5 |
787/2937 |
相關產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格（mL） |
價格（元） |
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36401ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
546/2186/7426 |
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36402ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
866/2656/8856 |
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36405ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
546/2186/7426 |
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36406ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
978/3186/8726 |
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36407ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
2488/9988/16488 |
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36408ES08/25/60 |
5 /25 /100 |
2868/13288/27688 |
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36409ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
528/2218 |
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36410ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
1848/6838 |
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36413ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
528/2218 |
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36414ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
1848/6838 |
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36415ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
938/3748 |
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36416ES08/25 |
5 mL/5×5 mL |
3528/14088 |
文獻引用
[1] Wang X , Yu C , Wang C , et al. Novel cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) inhibitor with suppression of cancer stemness activity against non-small-cell lung cancer[J]. European Journal of Medicinal Chemistry, 2019, 181. IF: 5.201
[2] Zheng L, Xiang C, Li X, et al. STARD13-correlated ceRNA network-directed inhibition on YAP/TAZ activity suppresses stemness of breast cancer via co-regulating Hippo and Rho-GTPase/F-actin signaling[J]. Journal of hematology & oncology, 2018, 11(1): 72. IF：7.33
[3] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells[J]. EBioMedicine, 2019, 41: 395-407. IF：6.68
經(jīng)典文章分享：抗體親和純化系列——抗體純化，若有選擇，必是首選
HB220424
