產品描述

天然蛋白A（Protein A）是一種發(fā)現于金黃色葡萄球菌的細胞壁表面蛋白，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結合大多數哺乳動物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結合特性上，ProteinA 和Protein G結合性能不太一樣（詳見附錄1）。

本品使用的是基因改造后的蛋白A，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時也去除了天然蛋白本身的非主要結合域以降低非特異性結合，rProtein A Agarose Resin 4FF以高度交聯的瓊脂糖凝膠為基質，重組Protein A為配基，具有很高的物理化學穩(wěn)定性，可以在相對較高的流速下進行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本品經過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應用廣泛。

本品rProtein A 4FF Chromatography Column，1 mL是一種裝填了rProtein A Agarose Resin 4FF的中壓預裝柱，規(guī)格1 mL，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統，如ÄKTA 等，方便客戶操作。

 

產品性質

基質（Matrix）	高度交聯的4%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	重組蛋白A
孔徑（Bead size）	45-165 µm
最大流速（Flowmax）	0.3MPa,3bar
儲存緩沖液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS
載量（Capacity）	＞40 mg Rabbit IgG/ mL 基質
pH范圍（pH range）	3-12

 

運輸與保存方法

冰袋運輸。2~8℃保存，有效期2年。

 

需準備試劑

【注】建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。

結合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl, 20 mM Na₂HPO₄, pH7.0

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

 

使用方法

【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結合/洗滌緩沖液透析。

1樣品純化（以Akta系統為例）

1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。

3）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1 mL /min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。

【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。

5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。

7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。

2 SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。

3 樹脂清洗

隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進行清洗：

1）去除沉淀或變性物質

① 用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進行清洗；

② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。

2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質

① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗；

② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事項

1）請勿冷凍保存本產品。

2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產品僅作科研用途！

 

附錄1. 蛋白A，G對不同物種Ig的結合能力總表

免疫球蛋白亞型	Protein A	Protein G	免疫球蛋白亞型	Protein A	Protein G
Human IgG	++++	++++	Mouse IgG	++++	++++
Human IgG1	++++	++++	Mouse IgG1	+	++++
Human IgG2	++++	++++	Mouse IgG2a	++++	++++
Human IgG3	+	++++	Mouse IgG2b	+++	+++
Human IgG4	++++	++++	Mouse IgG3	++	+++
Human IgM	Use anti-Human IgM		Mouse IgM	Use anti-Mouse IgM
Human IgE	NR	NR	Chicken IgG (IgY)	NR	NR
Human IgA	+	NR	Cow IgG	++	++++
Human IgA1	+	NR	Goat IgG	+	++++
Human IgA2	+	NR	Goat IgG1	+	++++
Human IgD	Use anti-Human IgD		Goat IgG2	++++	++++
Rat IgG	+	++	Goat IgM	NR	NR
Rat IgG1	NR	+	Guinea Pig IgG	++++	++
Rat IgG2a	NR	++++	Guinea Pig IgG1	++++	++
Rat IgG2b	NR	+	Guinea Pig IgG2	++++	++
Rat IgG3	+	++	Hamster IgG	+	++
Sheep IgG	+	++	Horse IgG	+	++++
Sheep IgG1	+	++	Rabbit IgG	++++	+++
Sheep IgG2	+	++	Rabbit IgM	NR	NR
Sheep IgM	NR	NR	Rabbit All isotypes	+++	++
Pig IgG	+++	+++	Monkey IgG	++++	++++
Cat IgG	++++	+	Donkey IgG	++	++++
Dog IgG	++++	+
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;