rProtein L Agarose Resin 4FF 蛋白L瓊脂糖快速純化樹(shù)脂
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產(chǎn)品說(shuō)明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
天然蛋白L（Protein L）是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來(lái)的能和免疫球蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，分子量為36 KD。本產(chǎn)品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了與抗體k鏈結(jié)合的特性，同時(shí)也不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。與 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能廣泛地結(jié)合各種來(lái)源及亞類的抗體，包括人、小鼠、大鼠、兔和雞，但不結(jié)合牛、山羊或綿羊來(lái)源的免疫球蛋白。
rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分離和純化單克隆抗體的通用性親和層析介質(zhì)，產(chǎn)品以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，重組Protein L為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)一步親和層析，可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
36408ES08 / 36408ES25/36408ES60 |
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規(guī)格 |
5 mL /25 mL/100 mL |
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì)（Matrix） |
高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
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配體（Ligand） |
重組蛋白L |
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孔徑（Bead size） |
45-165 µm |
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最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
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儲(chǔ)存緩沖液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
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載量（Capacity） |
＞15 mg Mouse IgG/mL基質(zhì) |
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pH范圍（pH range） |
3-10 |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存，有效期2年。
需準(zhǔn)備試劑
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾除菌。
平衡/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用說(shuō)明
【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值，可以用平衡/洗雜緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用平衡/洗雜緩沖液透析。樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。
1. rProtein L Agarose Resin 4FF的裝填（以各種中壓色譜層析柱的裝填為例）
1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無(wú)氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。
2）將樹(shù)脂懸浮起來(lái)，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。
3）如果使用儲(chǔ)液器，應(yīng)立即在層析柱和儲(chǔ)液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。
4）打開(kāi)層析柱底部出口，開(kāi)起泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過(guò)層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對(duì)所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的最大流速，這樣也可以得到一個(gè)很好的裝填效果。
【注】在隨后的色譜程序中，不要超過(guò)最大裝柱流速的75%，當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。
5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。
6）如果使用儲(chǔ)液器，去除儲(chǔ)液器，將分配器至于層析柱中。
7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。
8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開(kāi)始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。
2. 樣品純化
1）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
2）上樣：將樣品加到平衡好的rProtein L Agarose Resin 4FF中，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測(cè)。
【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。
3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測(cè)。
4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。
3. SDS-PAGE檢測(cè)
將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。
4. 樹(shù)脂清洗
rProtein L Agarose Resin 4FF可以重復(fù)使用而無(wú)需再生，但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，影響柱子的性能，這時(shí)需對(duì)柱子進(jìn)行清洗：
1）去除沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事項(xiàng)
1.請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2.rProtein L Agarose Resin 4FF使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3. 所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
附表 常見(jiàn)問(wèn)題與解答
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問(wèn)題 |
可能原因 |
推薦解決方法 |
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柱子反壓過(guò)高 |
篩板被堵塞 |
清洗或更換篩板 |
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填料被堵塞 |
清洗填料 |
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裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22 µm/0.45 µm濾膜過(guò)濾。 |
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樣品純化過(guò)程中曲線不穩(wěn) |
樣品或Buffer中有氣泡 |
趕出氣泡 |
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樣品和Buffer進(jìn)行脫氣 |
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洗脫組分中沒(méi)有目的蛋白 |
樣品中抗體濃度太低 |
使用其抗原做配體的介質(zhì) |
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抗體被降解 |
適當(dāng)?shù)奶岣呦疵?/font>pH |
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樣品與Protein L結(jié)合力低 |
換用Protein G或Protein A/G樹(shù)脂純化 |
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回收率逐漸減低 |
上樣量太多 |
減少上樣量 |
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柱子太臟，載量降低 |
清洗樹(shù)脂 |
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格（mL） |
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36401ES08/25/60 |
5/25/100 |
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36402ES08/25/60 |
5/25/100 |
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36403ES03/05/08/25/60 |
1/2/5/25/100 |
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36404ES08/25/60 |
5/25/100 |
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36405ES08/25/60 |
5/25/100 |
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36406ES08/25/60 |
5/25/100 |
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36409ES03/08 |
1/5×1 |
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36410ES08/25 |
5/5×5 |
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36413ES03/08 |
1/5×1 |
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36414ES03/08 |
5/5×5 |
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36417ES03/08 |
1/5 |
HB210824
