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        1. Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)

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          產(chǎn)品說明書

          FAQ

          COA

          已發(fā)表文獻

          產(chǎn)品描述

           

          Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair®  Reverse Transcriptase而開發(fā)的即用型預混液。該酶的熱穩(wěn)定性大幅度提高,可耐受高達50的反應(yīng)溫度,適合具有復雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時,該酶增強了與模板的親和力,適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。

          該預混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染,保證后續(xù)結(jié)果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有組分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅱ Reverse TranscriptaseRNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),并同時終止gDNA digester的作用,保證cDNA的完整性。

          該產(chǎn)品適用于兩步法RT-qPCR檢測,針對qPCR進行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例優(yōu)化,使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個區(qū)域起始,并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率,最大程度保證了qPCR結(jié)果的真實性和可重復性。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容SYBR® Green和探針法qPCR,可以根據(jù)實驗目的,選擇UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等試劑配合使用,進行高性能的基因表達分析。

           

          產(chǎn)品組分

           

          編號

          組分

          產(chǎn)品編號/規(guī)格

          11123ES10 (10 T)

          11123ES60 (100 T)

          11123-A

          RNase-free ddH2O

          1 mL

          2×1 mL

          11123-B

          5×gDNA digester Buffer

          20 μL

          200 μL

          11123-C

          gDNA digester

          10 μL

          100 μL

          11123-D

          2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

          100 μL

          1 mL

          】:2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有g(shù)DNA digester抑制劑。

           

          運輸保存方法

          干冰運輸。-20保存。有效期18個月。

           

          注意事項

          1)gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高濃度的甘油,使用前請短暫離心,吹打混勻。

          2)建議RNA是溶于水而不是TE Buffer中,因為TE Buffe會干擾gDNA去除以及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

          3)可以不經(jīng)過基因組去除步驟,直接進行逆轉(zhuǎn)錄,這樣所得到的結(jié)果與使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是請勿將gDNA digester與11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用,因其不含終止gDNA digester反應(yīng)的成分,會影響反轉(zhuǎn)錄和后續(xù)的qPCR實驗。

          4)反應(yīng)液的配制應(yīng)在冰上操作完成,操作過程應(yīng)避免RNase污染

          5) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

          6) 本產(chǎn)品僅作科研用途!

           

          第一鏈cDNA合成操作步驟

           

          1. 殘留基因組DNA去除

          RNase free離心管中配制如下混合液,用移液器輕輕吹打混勻。42 孵育2 min。

          組分

          使用量

          RNase free ddH2O

          To 10 μL

          5×gDNA digester Buffer

          2 μL

          gDNA digester

          1 μL

          Total RNA

          1 ng -5 μg*

          or mRNA

          1 ng-500 ng*

          【注】* 20 μL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議Total RNA的投入量不超過1 μg。如果目的基因的表達豐度低,最多投入5 μg Total RNA,否則RNA投入量過高,可能會超過后續(xù)定量PCR的線性范圍。

          2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制(20 μL體系)

          在第1步的反應(yīng)管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器輕輕吹打混勻。

          組分

          使用量

          第1步的反應(yīng)液

          10 μL

          2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

          10 μL

          3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置

          標準程序(適用于微量和常規(guī)量的模板量)

          溫度

          時間

          25

          5 min

          42

          30 min

          85

          5 min

          】:逆轉(zhuǎn)錄溫度:推薦使用42。對于GC含量模板或者復雜模板,可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到50

          4. 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng),也可-20℃短期保存,若需長期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復凍融。

           

          相關(guān)產(chǎn)品

           

          產(chǎn)品名稱

          貨號

          規(guī)格

          Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 

          11119ES60

          100 T

          Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix

          11120ES60

          100 T

          Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

          11121ES60

          100 T

          Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

          11141ES60

          100 T

          Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )

          11201ES08

          5 mL

          Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) 

          11202ES08

          5 mL

          Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) 

          11203ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

          11195ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,Low Rox)

          11196ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,High Rox)

          11197ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

          11198ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,Low Rox)

          11199ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,High Rox)

          11200ES08

          5 mL

          Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

          11184ES08

          5 mL

                                                                                                        HB210628

           

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