——Protein A /G 瓊脂糖或磁珠

 

 

產(chǎn)品介紹

Protein A、Protein G是最常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。 Protein A/G瓊脂糖或磁珠將Protein A、G共價(jià)偶聯(lián)到介質(zhì)表面，具有結(jié)合能力更強(qiáng)、結(jié)合范圍更廣、實(shí)用性更高的特點(diǎn)。
 

	Protein A/G 4FF Agarose	Protein A/G MagBeads
基質(zhì)	高度交聯(lián)4%瓊脂糖微球	聚合物磁性微球
填料粒徑	45-165 µm	1 µm
載量	>20 mg 人IgG/mL	>50 µg 人IgG/mg
優(yōu)勢(shì)	簡(jiǎn)單易用，無(wú)需輔助設(shè)備	操作簡(jiǎn)單
	孔徑大，結(jié)合力強(qiáng)	直徑小，動(dòng)力學(xué)好
	靶蛋白獲取量高	表面光滑，beads吸附很少，背景低，抗體消耗少
缺點(diǎn)	多孔易吸附（需要做pre-clear)	配套磁力架使用方便

 

 

產(chǎn)品應(yīng)用

 

1、純化抗體：一步純化即可從血清或腹水樣品中分離出高純度的抗體。

2、免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）：通過(guò)對(duì)某蛋白質(zhì)的富集，研究該蛋白的特性（如翻譯后修飾等）。

 

3、免疫共沉淀Co-IP(co-Immunoprecipitation)：通過(guò)對(duì)某蛋白質(zhì)的富集，研究與其結(jié)合的其他蛋白（即蛋白-蛋白相互作用、蛋白復(fù)合物等）。

 

 

 

操作流程

 

 

 

實(shí)用案例

1、Protein A/G 4FF Agarose純化兔血清中的抗體。

 

圖1 Protein A/G 4FF Agarose純化抗體結(jié)果電泳圖

 

2、Protein A/G 4FF Agarose用于COIP: 針對(duì)p65和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶9（CDK9）的特異性抗體對(duì)提取的總細(xì)胞蛋白進(jìn)行免疫沉淀分析。

 

Fig 2. Immunoprecipitants were then subjected to western blot analysis using specific antibodies against CDK9 and p65.

 

 

常見(jiàn)問(wèn)題

1、Co-IP背景較深或有雜帶？

① 固相基質(zhì)的非特異性結(jié)合，對(duì)瓊脂糖微球做pre clear或者更換磁珠。

② 抗體結(jié)合非特異的蛋白，可設(shè)置對(duì)照排除非特異性條帶。

③ 洗滌不當(dāng)造成雜帶，可優(yōu)化緩沖液。
 

2、靶蛋白為什么沒(méi)有條帶？

① 沒(méi)有添加抑制劑或裂解液不合適，導(dǎo)致蛋白構(gòu)象改變不能結(jié)合或者降解。

② 餌蛋白較難洗脫，換成高強(qiáng)度的洗脫緩沖液。

③ 選用的抗體不合適，建議IP驗(yàn)證過(guò)的抗體，并優(yōu)化下抗體用量。

④ 蛋白間為弱相互作用，或者相互作用依賴翻譯后修飾。
 

3、Input條帶清晰，Co-IP條帶很弱？

① 餌蛋白X和靶蛋白Y的相互作用本身比較弱。

② 餌蛋白X并不是靶蛋白Y的唯一，只部分Y與X互作；可以嘗試反向拉，比如用Y去拉X，可能效果比較好。
 

4、我的蛋白和抗體重鏈分子量很接近，怎樣減少抗體干擾？

① IP/WB一抗使用不同種屬來(lái)源，選擇與IP抗體種屬無(wú)交叉反應(yīng)的二抗。

② 特殊二抗：比如僅識(shí)別重鏈或者輕鏈的二抗，或者僅識(shí)別天然抗體的二抗。

③ 直接源頭遏制：將抗體交聯(lián)到固相基質(zhì)或protein A/G上，避免洗脫干擾。 
 

5、瓊脂糖難離心，容易吸上來(lái)一點(diǎn)，怎么辦？ 

① 使用帶濾膜的離心柱，下部有接樣管，瓊脂糖完全截留在濾膜上 

② 換成磁珠
 

6、我的目的蛋白因?yàn)闆](méi)有對(duì)應(yīng)的特異性抗體而無(wú)法進(jìn)行免疫沉淀，怎么辦？

① 若此蛋白帶標(biāo)簽，可選擇針對(duì)此蛋白的標(biāo)簽抗體來(lái)進(jìn)行免疫沉淀。

 

 

訂購(gòu)信息

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格（mL）	價(jià)格（元）
蛋白A/G瓊脂糖純化樹(shù)脂	36403ES03/05/08/25/60	1/2/5/25/100	278/538/878/2886/7426
蛋白A/G瓊脂糖快速純化樹(shù)脂	36404ES08/25/60	5 /25 /100	978/3186/8726
蛋白A/G免疫沉淀磁珠	36417ES03/08	1/5	787/2937

 

 

相關(guān)產(chǎn)品

 

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格（mL）	價(jià)格（元）
蛋白A瓊脂糖純化樹(shù)脂	36401ES08/25/60	5 /25 /100	546/2186/7426
蛋白A瓊脂糖快速純化樹(shù)脂	36402ES08/25/60	5 /25 /100	866/2656/8856
蛋白G瓊脂糖純化樹(shù)脂	36405ES08/25/60	5 /25 /100	546/2186/7426
蛋白G瓊脂糖快速純化樹(shù)脂	36406ES08/25/60	5 /25 /100	978/3186/8726
蛋白L瓊脂糖純化樹(shù)脂	36407ES08/25/60	5 /25 /100	2488/9988/16488
蛋白L瓊脂糖快速純化樹(shù)脂	36408ES08/25/60	5 /25 /100	2868/13288/27688
蛋白A純化預(yù)裝柱，1mL	36409ES03/08	1 mL/5×1 mL	528/2218
蛋白A純化預(yù)裝柱，5mL	36410ES08/25	5 mL/5×5 mL	1848/6838
蛋白G純化預(yù)裝柱，1mL	36413ES03/08	1 mL/5×1 mL	528/2218
蛋白G純化預(yù)裝柱，5mL	36414ES08/25	5 mL/5×5 mL	1848/6838
蛋白L純化預(yù)裝柱，1mL	36415ES03/08	1 mL/5×1 mL	938/3748
蛋白L純化預(yù)裝柱，5mL	36416ES08/25	5 mL/5×5 mL	3528/14088

文獻(xiàn)引用
 

[1] Wang X , Yu C , Wang C , et al. Novel cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) inhibitor with suppression of cancer stemness activity against non-small-cell lung cancer[J]. European Journal of Medicinal Chemistry, 2019, 181.  IF: 5.201

[2] Zheng L, Xiang C, Li X, et al. STARD13-correlated ceRNA network-directed inhibition on YAP/TAZ activity suppresses stemness of breast cancer via co-regulating Hippo and Rho-GTPase/F-actin signaling[J]. Journal of hematology & oncology, 2018, 11(1): 72.        IF：7.33

[3] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells[J]. EBioMedicine, 2019, 41: 395-407.     IF：6.68