问鼎娱乐.com|极速飞艇的冠亚和计划|极速赛车计划群群名|sg幸运飞艇计划官方版下载

<label id="6kt4j"></label>

    <li id="6kt4j"></li>
        1. Hieff UNICON? Advanced qPCR SYBR Master Mix

          更多活動(dòng)更多優(yōu)惠,盡在翌圣商城》

          批量采購, 請點(diǎn)擊詢價(jià)

          產(chǎn)品說明書

          FAQ

          COA

          已發(fā)表文獻(xiàn)

           

          Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)溶液,具有熒光強(qiáng)度高,靈敏度高和特異性強(qiáng),擴(kuò)增產(chǎn)量高等特點(diǎn),顏色為藍(lán)色,具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動(dòng),可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。同時(shí)配方添加了提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子,使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。

           

          儲(chǔ)存條件

          -25~-15℃避光保存,有效期18個(gè)月。

           

          使用說明

          1. 推薦qPCR反應(yīng)體系

          組分

          體積 μL***

          體積 μL***

          終濃度

          Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix

          25

          10

          Forward Primer (10 μM)*

          1

          0.4

          0.2 μM

          Reverse Primer (10 μM)*

          1

          0.4

          0.2 μM

          模板DNA/cDNA**

          x

          x

          -

          無菌超純水

          Up to 50

          Up to 20

          -

          1 qPCR反應(yīng)體系

          *通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。

          **如模板為未稀釋cDNA原液,使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10,最佳模板加入量以保證擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為宜。

          ***推薦使用20 μL或50 μL,以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性;上機(jī)前需充分混勻,避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

           

          1. 反應(yīng)程序

          循環(huán)步驟

          溫度

          時(shí)間

          循環(huán)數(shù)

          預(yù)變性

          95℃

          2 min

          1

          變性

          95

          10 sec

          40

          退火/延伸*

          60

          30 sec**

          熔解曲線階段*

          儀器默認(rèn)設(shè)置

          1

          2 qPCR反應(yīng)程序

          *退火溫度和時(shí)間:請根據(jù)引物和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。

          **熒光信號(hào)采集:請勿忘記打開熒光信號(hào)采集,按照儀器使用說明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置,幾種常見儀器的時(shí)間設(shè)定如下:

          20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

          31 sec:Applied Biosystems 7300

          32 sec:Applied Biosystems 7500

          ***熔解曲線:通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。

           

          適用機(jī)型

          ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

          Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

          Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

          Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

          Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

          Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;

          Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR

           

          引物設(shè)計(jì)指南

          1. 推薦引物長度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長度150 bp為佳,可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
          2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
          3. 引物堿基分布均勻,避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
          4. 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
          5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對。避免引物 3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
          6. 設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測,只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。

           

          注意事項(xiàng)

          1. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
          2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀,手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清,不影響試劑性能。
          3. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒(貨號(hào):11141ES),以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
          4. 若需要電泳,為了獲得清晰的條帶,建議將qPCR產(chǎn)物稀釋20-30倍后進(jìn)行電泳。
          5. 本產(chǎn)品僅作科研用途!

          400-6111-883