產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
ER-Tracker探針是一系列具有細胞膜透過性，對活細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細胞染色后用醛固定，可以部分保留活細胞的染色特征。
本品為ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，藍色熒光，屬于DapoxylTM(DPX)家族成員之一。DPX系列染料均具有長發(fā)射波長、高吸光系數(shù)、高量子產(chǎn)量、較大斯托克司頻移等特點。但這些染料具有環(huán)境敏感性，會隨之出現(xiàn)極性增強、最大熒光波長偏移到更高波長處、量子產(chǎn)量下降等現(xiàn)象。
本品為溶于DMSO的1 mM ER-Tracker Blue-White DPX儲存液，推薦工作濃度為100 nM-1 μM。
產(chǎn)品性質(zhì)
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分子式（Formula） |
C26H21F5N4O4S |
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分子量（Molecular Weight） |
580.53 |
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外觀（Appearance） |
Yellow Solution |
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Ex/Em |
374/430-640 nm |
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濾片（Filter） |
DAPI or UV longpass |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸和保存方法
冰袋運輸。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反復凍融。
注意事項
1）避免反復凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲存于無霜冰箱。
2）DMSO有毒，請小心操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
本實驗方案經(jīng)牛肺動脈內(nèi)皮細胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細胞系驗證。但不同的細胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進行進一步優(yōu)化。
1. 試劑準備
使用前將ER-Tracker Blue-White DPX回溫至室溫，并簡短離心使該DMSO溶液至管底。
2. 細胞樣品處理及染色
2.1 將1 mM ER-Tracker Blue-White DPX儲存液按照實驗要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度100 nM-1µM。建議在不影響實驗結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進行染色，可得到最佳實驗結(jié)果。
2.2 染色
對于貼壁細胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液于37℃孵育細胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。
注：由于ER-Tracker Blue-White DPX探針具有較高光敏感性，會產(chǎn)生波動較大的發(fā)射吸收峰值，使用長通DAPI濾光片效果最理想。 另，操作過程中需盡量避光。
細胞如需固定，請參考以下步驟。
3． 細胞固定及透化處理
3.1 固定細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞10-20 min。
注：已染色細胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Blue-White DPX留在細胞內(nèi)，熒光信號會有部分衰減。
3.2 （可選）透化處理：若細胞還需進行后續(xù)染色，需對細胞利用0.2% TritonX-100 透化10 min。
3.3 清洗觀察細胞：細胞固定后，可用合適緩沖液進行清洗，每次5 min，共2次。鏡檢即可。
相關(guān)產(chǎn)品
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40761ES50 |
ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)藍色熒光探針（活細胞） |
50 µL(1mM) |
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40763ES20 |
ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide),for live-cell imaging 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針 |
20 µL (1mM) |
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40764ES20 |
ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide),for live-cell imaging 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針 |
20 µL (1mM) |
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40765ES30 |
Golgi-Tracker Green (BODIPY® FL C5-Ceramide) 高爾基體綠色熒光探針 |
30 µL (1mM) |
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40741ES50 |
50 µg |
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40742ES50 |
50 µg |
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40743ES50 |
50 µg |
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40738ES50 |
50 μL |
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40739ES50 |
50 μL |
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36314ES60 |
4% Paraformaldehyde 4%多聚甲醛 |
100 mL |
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36314ES76 |
500 mL |
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20107ES72 |
250 mL |
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60162ES76 |
500 mL |
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