產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
DiI、DiO、DiD和DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)，這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。這類染料具有很高的摩爾消光系數(shù)，極性依賴性的熒光和很短的激發(fā)壽命。
DiD是DiI的衍生物，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，這一特性使其特別適合標(biāo)記具顯著自熒光效應(yīng)的細(xì)胞或組織。DiD可被633 nm的氦-氖（He-Ne）激光所激發(fā)，呈紅色熒光，在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，進(jìn)入細(xì)胞后，染料在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時可以使整個細(xì)胞染色。
產(chǎn)品性質(zhì)
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英文別名（English Synonym） |
DiIC18(5); 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate |
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分子式（Formula） |
C61H99ClN2O4 |
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分子量（Molecular Weight） |
959.91 |
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Ex/Em(nm) |
644/663 |
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推薦濾光器 |
XF47-Omega，31023-Chroma |
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外觀（Appearance） |
紅色或紫色或深藍(lán)色固體 |
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純度（Purity） |
＞97%（TLC） |
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溶解性（Solubility） |
溶于DMF，DMSO，乙醇 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸和保存方法
冰袋（wet ice）運輸。產(chǎn)品-20 ºC干燥避光保存，有效期二年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
注：
a、未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融，可穩(wěn)定保存6個月。
b、發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化
2. 懸浮細(xì)胞染色
（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37℃孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5 min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。
3. 貼壁細(xì)胞的染色
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37℃孵育細(xì)胞2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。
4. 顯微鏡檢測
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
表1 相關(guān)產(chǎn)品性質(zhì)
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
分子量 |
Ex/Em |
推薦濾光器 |
| DiO(DiOC18(3)) 細(xì)胞膜綠色熒光探針 |
40725ES10 |
881.7 |
484/501 nm |
XF23-Omega, 31001-Chroma |
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40726ES10 |
933.87 |
550/567 nm |
XF32-Omega, 31002-Chroma |
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40758ES25 |
959.91 |
644/663 nm |
XF47-Omega, 31023-Chroma |
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40757ES25 |
1013.4 |
748/780 nm |
XF112-Omega,41009-Chroma |
HB180709
