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產品描述
ER-Tracker探針是一系列具有細胞膜透過性，對活細胞內質網具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內質網的染色，且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細胞染色后用醛固定，可以部分保留活細胞的染色特征。
本品為，由紅色熒光染料BODIPY® TR和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成，其Ex= 587 nm，Em= 615 nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一種常用降血糖藥物，在胰島β細胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度結合ATP-敏感型K+通道的磺脲受體，且本受體富集存在內質網上，因此適合用作內質網熒光探針。
本品為溶于DMSO的1 mMER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)儲存液，推薦工作濃度為～1 μM。
產品性質
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分子式（Formula） |
C44H42BClF2N6O7S2 |
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分子量（Molecular Weight） |
915.23 |
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外觀（Appearance） |
液體 |
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Ex/Em |
587/615 nm |
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濾片（Filter） |
TRITC |
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結構式（Structure） |
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運輸和保存方法
冰袋運輸。≤-20℃避光干燥保存，至少六個月有效。避免反復凍融。
注意事項
1）避免反復凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲存于無霜冰箱。
2）DMSO有毒，請小心操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產品僅作科研用途！
使用方法
本實驗方案經牛肺動脈內皮細胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細胞系驗證。但不同的細胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進行進一步優(yōu)化。
1. 試劑準備
使用前將ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)回溫至室溫，并簡短離心使該DMSO溶液至管底。
2. 細胞樣品處理及染色
2.1 將1 mM ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)儲存液按照實驗要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度為～1 µM。建議在不影響實驗結果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進行染色，可得到最佳實驗結果。
2.2 染色
對于貼壁細胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液于37℃孵育細胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。
細胞如需固定，請參考以下步驟。
3．細胞固定
3.1 固定細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞2 min。
注：已染色細胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)留在細胞內，熒光信號會有部分衰減。
3.2 清洗觀察細胞：細胞固定后，可用合適緩沖液進行清洗，每次5 min，共2次。清洗后可對細胞進行后續(xù)封片、鏡檢或進一步染色。
注：不建議對細胞進行透化處理，因為經Triton X-100透化后，無信號保留。
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