產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff Trans® PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種經(jīng)過優(yōu)化改造后的線性化聚乙烯亞胺（Polyethylenimine Linear, PEI），濃度為1 mg/mL。本產(chǎn)品純化學(xué)合成，不含動物源成分，特別適合多質(zhì)粒的共同轉(zhuǎn)染，用于重組病毒載體的生產(chǎn)，以及重組蛋白的瞬時表達(dá)生產(chǎn)。本產(chǎn)品細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高、兼容抗生素，在HEK293等細(xì)胞中基因表達(dá)效率較高。
運輸與保存方法
運輸方式：冰袋運輸。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。
注意事項
1）為提高轉(zhuǎn)染效率，建議懸浮細(xì)胞在無血清培養(yǎng)體系中馴化幾天后進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。
2）轉(zhuǎn)染過程中推薦使用高質(zhì)量的質(zhì)粒，如不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及通風(fēng)櫥操作。
4）本產(chǎn)品僅用于科研用途。
轉(zhuǎn)染操作流程
一 懸浮細(xì)胞（以1 L體系為例）
1 接種細(xì)胞
根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議細(xì)胞接種密度為1-1.5×106 cells/mL，使第二天轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為2-3×106 cells/mL為宜。
2 轉(zhuǎn)染復(fù)合物配置
1）質(zhì)粒與試劑比例：建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:1 - 1:3。
2）質(zhì)粒稀釋：使用50 mL無血清培養(yǎng)基（Opti-MEM）稀釋2 mg質(zhì)粒，并輕輕混勻。
3）試劑稀釋：使用48 mL無血清培養(yǎng)基（Opti-MEM）稀釋2 mL Hieff Trans® PEI轉(zhuǎn)染試劑，并輕輕混勻。
4）配置復(fù)合物：將配置好的50 mL試劑稀釋液加入到50 mL質(zhì)粒稀釋液中，輕輕渦旋混勻后，室溫靜置10-20 min，形成質(zhì)粒-PEI復(fù)合物，備用。
3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
1）直接將100 mL的質(zhì)粒-PEI復(fù)合物加入1 L培養(yǎng)的細(xì)胞中。
2）在合適溫度與CO2等條件下繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，并在培養(yǎng)72 h-96 h或摸索的合適條件下進(jìn)行病毒收獲。
圖1 Hieff Trans® PEI轉(zhuǎn)染試劑操作步驟示意圖
二 貼壁細(xì)胞（以10 cm培養(yǎng)皿為例）
1 接種細(xì)胞
根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議細(xì)胞鋪板密度為50-80 %，使第二天轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度70-90 %為宜。
2 轉(zhuǎn)染復(fù)合物配置
1）質(zhì)粒與試劑比例：建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:1至1:3。
2）質(zhì)粒稀釋：使用250 μL無血清培養(yǎng)基（Opti-MEM）稀釋8 μg質(zhì)粒，并輕輕混勻。
3）試劑稀釋：使用242 μL無血清培養(yǎng)基（Opti-MEM）稀釋8 μL Hieff Trans® PEI轉(zhuǎn)染試劑，并輕輕混勻。
4）配置復(fù)合物：將配置好的250 μL試劑稀釋液加入到250 μL質(zhì)粒稀釋液中，輕輕渦旋混勻后，室溫靜置10-20 min，形成質(zhì)粒-PEI復(fù)合物，備用。
3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
1）直接將500 μL的質(zhì)粒-PEI復(fù)合物加入10 mL培養(yǎng)的細(xì)胞中。
2）在合適溫度與CO2等條件下繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，并在培養(yǎng)72 h-96 h或摸索的合適條件下進(jìn)行病毒收獲。
表1 不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）
|
培養(yǎng)容器 |
表面積（cm2） |
DNA稀釋 |
轉(zhuǎn)染試劑稀釋 |
培養(yǎng)基 總量 |
||
|
DNA量（μg） |
稀釋液體積（μL） |
轉(zhuǎn)染試劑量（μL） |
稀釋液體積（μL） |
|||
|
96孔板 |
0.3 |
0.1 |
5 |
0.1 |
5 |
100 μL |
|
48孔板 |
0.7 |
0.2 |
10 |
0.2 |
10 |
200 μL |
|
24孔板 |
1.9 |
0.5 |
25 |
0.5 |
25 |
500 μL |
|
12孔板 |
3.8 |
1 |
25 |
1 |
25 |
1 mL |
|
6孔板 |
10 |
2 |
50 |
2 |
50 |
2 mL |
|
25 cm2培養(yǎng)瓶 |
21 |
4 |
100 |
4 |
100 |
4 mL |
|
75 cm2培養(yǎng)瓶 |
58 |
8 |
250 |
8 |
250 |
10 mL |
|
10 cm培養(yǎng)皿 |
60 |
8 |
250 |
8 |
250 |
10 mL |
HB220930
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