產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
UltraNuclease（全能核酸酶），又稱非限制性核酸內(nèi)切酶、廣譜核酸酶；是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進行切割，將核酸完全消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表達純化并在GMP環(huán)境下制備，不僅可在科學(xué)研究中降低細胞上清和細胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究；還可以應(yīng)用在病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑，將宿主殘留核酸降至皮克（pg）級別從而提高生物制品功效和安全性；并且可以有效防止細胞治療和疫苗研究中人外周血單核細胞（PBMC）的結(jié)團。
本品以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油）中，無色透明液體。
產(chǎn)品性質(zhì)
|
來源 |
E. coli |
|
分子量（Molecular Weight） |
26.5 kDa |
|
等電點 |
6.85 |
|
純度（Purity） |
≥ 99%（SDS-PAGE） |
|
酶活（Enzyme Activity） |
250-300 U/μL |
|
比活（Specific Activity） |
≥ 1.5×106 U/mg蛋白 |
|
最適pH（Optimum pH） |
8.0（工作范圍pH 6-10） |
|
最適溫度（Optimum Temperature） |
37℃（工作范圍0-42℃） |
|
輔助因子（Cofactor） |
1-10 mM Mg2+ |
|
蛋白酶活性（Protease） |
陰性 |
|
無菌檢查（Sterility） |
陰性 |
|
內(nèi)毒素（Endotoxin） |
< 0.25 EU/1000 U |
|
宿主蛋白殘留（Host protein） |
< 10 ppm（μg/mL） |
|
儲存緩沖液（Storage Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油 |
|
活性單位定義（Unit Definition） |
在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件下，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）。 |
運輸和保存方法
干冰運輸。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周，建議過濾除菌防止微生物污染。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
推薦使用條件
|
條件參數(shù) |
最佳條件 |
有效條件 |
|
Mg2+ |
1-5 mM |
1-10 mM |
|
pH |
8-9 |
6-10 |
|
溫度 |
37℃ |
0-42℃ |
|
DTT |
0-100 mM |
>0 mM |
|
巰基乙醇 |
0-100 mM |
>0 mM |
|
單價陽離子 |
0-20 mM |
0-150 mM |
|
磷酸根離子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
在最佳條件下推薦的使用量及處理時間（37℃，2mM Mg2+，pH 8.0）
|
UltraNuclease用量（終濃度） |
處理時間 |
|
0.25 U/mL |
> 10 h |
|
2.5 U/mL |
> 4 h |
|
25 U/mL |
30 min |
使用方法
1、 樣本準(zhǔn)備
貼壁細胞：去除培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞，去除上清。
懸浮細胞：離心收集細胞，用PBS清洗細胞，6,000 rpm 離心10 min，收集沉淀。
大腸桿菌：離心收集菌體，用PBS清洗1次，8,000 rpm 離心5 min，收集沉淀。
2、樣品處理
將收集到的細胞沉淀按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比1：(10~20) 的比例進行裂解處理，也可通過在冰上或室溫通過機械或化學(xué)方法裂解細胞（1 g細胞約為109個）。
3、酶的添加
1）添加適量MgCl2將反應(yīng)體系中的Mg2+ 濃度調(diào)整在1-5 mM范圍內(nèi)，將pH調(diào)整成8-9。
2）按照250 Units消化1 g細胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟據(jù)上表中的推薦使用量自行選定添加方案，在一定范圍內(nèi)增加酶量，消化所需時間相應(yīng)減少。
【注】全能核酸酶的酶活受離子濃度、反應(yīng)溫度及pH等因素的影響，初次使用時建議摸索最適濃度。
4、上清獲取
以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心30min獲得細胞裂解液上清，再進行后續(xù)相關(guān)實驗。
【注】若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長孵育時間。
HB220729
