產(chǎn)品簡介

 

本產(chǎn)品是一種專為懸浮體系規(guī)?；a(chǎn)AAV而開發(fā),產(chǎn)品是經(jīng)過優(yōu)化改造后的線性化聚乙烯亞胺（PolyethylenimineLinear,PEI）。本產(chǎn)品純化學合成，不含動物源成分，細胞毒性低，產(chǎn)品以無菌液體形式提供，具備廣泛的AAV血清型適用性。本產(chǎn)品DNA荷載能力強、轉(zhuǎn)染復合物比例低和復合物穩(wěn)定性高，為大規(guī)模AAV生產(chǎn)提供便利。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	40823ES01/ 40823ES03 / 40823ES10/ 40823ES60
規(guī)格	100 μL/ 1 mL / 10 mL /100 mL

 

組分信息

 

組分名稱	40823ES01	40823ES03	40823ES10	40823ES60
Hieff Trans® PEI AAV Transfection Reagent	100 μL	1 mL	10 mL	100 mL

 

儲存條件

 

2-8ºC保存，有效期2年。

 

轉(zhuǎn)染操作流程

 

1. 接種細胞

  根據(jù)細胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議細胞接種密度為1-1.5E6 cells/mL，使第二天轉(zhuǎn)染時細胞密度為2-3E6 cells/mL 為宜。

2. 轉(zhuǎn)染復合物配置(以1 L體系為例)

1. 質(zhì)粒與試劑比例：質(zhì)粒（μg）與轉(zhuǎn)染試劑（μL）為1:0.5-1:1。
2. 質(zhì)粒稀釋：使用25 mL無血清培養(yǎng)基稀釋2 mg質(zhì)粒，并輕輕混勻。
3. 試劑稀釋：使用25 mL無血清培養(yǎng)基稀釋1 mL Hieff Trans® PEI AAV Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑，并輕輕混勻。
4. 配置復合物：將配置好的25 mL質(zhì)粒稀釋液加入到25 mL轉(zhuǎn)染試劑稀釋液中，輕輕渦旋混勻后，室溫靜置20 mins，形成質(zhì)粒-PEI復合物，備用。

表 1 轉(zhuǎn)染復合物參數(shù)（僅供參考）

參數(shù)類型	推薦條件	條件范圍
核酸用量（每百萬細胞）	1 μg	0.5 μg-2 μg
核酸與轉(zhuǎn)染試劑比例（μg:μL）	1:0.5	1:0.5-1:1
轉(zhuǎn)染復合物體積（%培養(yǎng)體積）	5%	1%-10%
復合物孵育時間	20 mins	15 mins-60 mins
復合物介質(zhì)（無血清等添加物）	無血清培養(yǎng)基	無血清培養(yǎng)基，PBS

3. 轉(zhuǎn)染細胞

1. 直接將50 mL的質(zhì)粒-PEI復合物均勻加入細胞中。
2. 在37℃與5% CO₂條件下繼續(xù)培養(yǎng)細胞，并在培養(yǎng)72 h后收獲病毒。

圖一 Hieff Trans^® PEI AAV Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑操作步驟示意圖

表 2 不同細胞培養(yǎng)參數(shù)轉(zhuǎn)染試劑用量（僅供參考）

細胞培養(yǎng)參數(shù)			轉(zhuǎn)染參數(shù)
細胞密度	培養(yǎng)體積	總細胞數(shù)量	復合物體積	DNA用量	轉(zhuǎn)染試劑體積
2E6 cells/mL	30 mL	6E7 cells	1.5 mL	60 μg	60 μL
	1 L	2E9 cells	50 mL	2 mg	2 mL
	100 L	2E11 cells	5 L	200 mg	200 mL
2.5E6 cells/mL	30 mL	7.5E7 cells	1.5 mL	75 μg	75 μL
	1 L	2.5E9 cells	50 mL	2.5 mg	2.5 mL
	100 L	2.5E11 cells	5 L	250 mg	250 mL

 

注意事項

 

1. 為提高轉(zhuǎn)染效率，建議懸浮細胞在無血清培養(yǎng)體系中馴化幾天后進行轉(zhuǎn)染操作。

2. 轉(zhuǎn)染過程中推薦使用高質(zhì)量的質(zhì)粒，如無內(nèi)毒素、無蛋白和RNA殘留的質(zhì)粒。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及通風櫥操作。

 

 

Ver.CN20250317