Hifair^® III Reverse Transcriptase是在Hieff^® M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hieff^® M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達(dá)65℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair^® III Reverse Transcriptase合成全長(zhǎng)cDNA的能力也有了提升，可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)19.8 kb的cDNA。Hifair^® III Reverse Transcriptase, 600 U/μL, Glycerol-free第三代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶（無甘油版）可用于制備凍干制劑、可凍干RT-LAMP試劑等。

 

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		11297ES09 (6 KU)	11297ES12 (12 KU)	11297ES75 (300 KU)
11297	Hifair® III Reverse Transcriptase (600 U/μL)	10 μL	20 μL	500 μL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

凍干制劑、可凍干RT-LAMP試劑盒。

 

活性定義

以Poly(A).Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，效期6個(gè)月。

 

注意事項(xiàng)

1. 請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。

2. 所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止RNA降解。

3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

參考操作步驟

1. 體系配置：

組分	組分	使用量
13840-A	10×Bst Buffer	2.5 µL
13840-C	100 mmol/L MgSO4	2 µL
dNTP Mix (100 mmol/L)	dNTP Mix (100 mmol/L)	3.5 µL
dUTP Mix (100 mmol/L)（可選）	dUTP Mix (100 mmol/L)（可選）	0.35 µL
11297	Hifair® III Reverse Transcriptase (600 U/µL, Glycerol-free)	0.1 µL
10703	Murine RNase inhibitor (200 U/µL, Glycerol-free)	0.2 µL
13839（可選）	Heat Labile UDG (200 U/µL)（可選）	0.005 µL
10×Primersa	10×Primers	2 µL
13840-Bb	Bst Ⅱ Plus DNA polymerase (120 U/µL, Glycerol-free)	0.5 µL
RNase free ddH2O	RNase free ddH2O	To 25 µL

【注】：

a. 10×Primers：16 µmol/L FIP/BIP, 2 µmol/L F3/B3, 4 µmol/L Loop F/B each；引物組的比例也可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

b. 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況來調(diào)整用量。

2. 反應(yīng)程序設(shè)置

溫度	時(shí)間	作用
37℃	2 min	消化
65℃	30-60 mina	逆轉(zhuǎn)錄和恒溫?cái)U(kuò)增
85℃	10 min	滅活

【注】：

a. 探針法的引物可以直接選擇目的通道收集熒光，1 min采集一次熒光。染料法可以額外添加貨號(hào)為13841的染料，通道選擇SYBR，1 min采集一次熒光。   

 

相關(guān)產(chǎn)品

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Bst Ⅱ Plus DNA Polymerase (40 U/μL)	14402ES92	8,000 U
Bst Ⅱ Plus DNA Polymerase (2,000 U/μL)	14403ES20	20,000 U
10× Bst Ⅱ Plus DNA Polymerase Buffer	15441ES03	1 mL
RT-LAMP Dye Assay Kit（UDG plus）	13762ES60	100 T
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit	13906ES65	100 T
新冠RT-LAMP檢測(cè)預(yù)混液 RT-LAMP COVID-19 Primer Master Mix (N)	13995ES60	100 T
Uracil DNA Glycosylase (UDG),   Heat-Labile (Glycerol-Free)	10707ES60	100 U
Hifair® III Reverse Transcriptase,200 U/μL,Glycerol-free	11302ES12	10,000 U
Murine RNase Inhibitor(200   U/µL,Glycerol-free)	10703ES05	2 KU
Murine RNase Inhibitor(40   U/µL,Glycerol-free)	10701ES05	2 KU
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶	11300ES92	10,000 U

HB220720