Hifair? III Reverse Transcriptase,200 U/μl,Glycerol-free 第三代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶(無甘油版)
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hifair® III Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的新一代逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，其cDNA合成速度快，且熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達(dá)60℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® III Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴(kuò)增長達(dá)19.8 kb的cDNA。
產(chǎn)品組分
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編號(hào) |
組分 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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11302ES12 (10000 U) |
11302ES75 (5*10000 U) |
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11302 |
Hifair® III Reverse Transcriptase, 200 U/μl, Glycerol-free |
50 μL |
250 μL |
產(chǎn)品應(yīng)用
全長cDNA文庫構(gòu)建；終點(diǎn)法PCR；實(shí)時(shí)定量PCR等。
活性定義
以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期6個(gè)月。
注意事項(xiàng)
1. 請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2. 所有操作均應(yīng)在冰上進(jìn)行，防止RNA降解；
3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本；
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級(jí)結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）
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組分 |
使用量 |
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RNase free ddH2O |
to 13 μL |
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Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL |
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or 1 μL |
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or 1 μL |
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模板RNA |
Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并用移液器輕輕吹打混勻。
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
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組分 |
使用量 |
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上一步的反應(yīng)液 |
13 μL |
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5×Buffer |
4 μL |
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dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
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Hifair® III Reverse Transcriptase, 200 U/μl, Glycerol-free |
1 μL |
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RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
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溫度 |
時(shí)間 |
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25℃ |
5 min |
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55℃ |
15-30 min |
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85℃ |
5 min |
【注】
1）當(dāng)使用Random Primers時(shí)，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用55℃；對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到60℃；
3) 可將逆轉(zhuǎn)錄時(shí)間延長到45-60min，有助于提高產(chǎn)量；
4）85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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10124ES76 |
500 μL |
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10124ES80 |
1 mL |
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12908ES60 |
1600 U |
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12908ES97 |
8000 U |
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|
12908ES98 |
40000 U |
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10603ES05 |
2 KU |
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10603ES10 |
10 KU |
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10603ES20 |
100 KU |
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|
10603ES60 |
200 KU |
HB210923
