Hieff NGS^® Novel DNA Ligation Module是針對Illumina^®與MGI^®高通量測序平臺文庫構(gòu)建專業(yè)設(shè)計的DNA連接模塊，采用一款我公司自主研發(fā)的新型連接酶Novel T4 DNA ligase。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina^®與MGI^®測序平臺適用的DNA接頭，具有高效的連接能力，兼容各類樣本，同時也適用于自動化平臺，對于復雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接更顯優(yōu)勢，均可得到優(yōu)異的測序質(zhì)量。本產(chǎn)品與Hieff NGS^® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Novel HF Amplification Mix for MGI^®（Cat#13344）共同用于DNA文庫構(gòu)建，通過MGI^®高通量平臺測序已驗證其有效性。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量與功能驗證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

 

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		12626ES24	12626ES96
12626-A	Novel T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL
12626-B	5×Novel Ligation Buffer	480 μL	2×960 μL

 

運輸與保存方法

冰袋運輸。

-20℃保存，效期18個月。

 

注意事項

1.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2.本產(chǎn)品僅用作科研用途！

 

使用方法

1. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表1列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。

表1  500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩爾比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩爾比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復和加A處理后一般不純化，直接進行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復加A體系兼容，進行接頭連接。反應體系請參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應15分鐘即可。

表2  Adapter Ligation體系

名稱	體積（μL）
dA-tailed DNA	60
5×Novel Ligation Buffer	20*
Novel T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	X**
ddH2O	To 100

【注】：*對于5×Novel Ligation Buffer，請上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時離心后使用。

**根據(jù)自身需求加入適量的接頭。

【接頭添加計算舉例】：

當Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時，接頭應該添加多少？

第一步，計算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；

Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，計算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)注意事項三表2查詢接頭添加比例；

根據(jù)表2，查得Input DNA 100ng時接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，計算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；

接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

綜上，接頭可添加3.4 μL，加1.6 μL水補齊至5 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）

HB220829