Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module是針對(duì)Illumina®與MGI®高通量測(cè)序平臺(tái)文庫構(gòu)建專業(yè)設(shè)計(jì)的DNA連接模塊，其中最大的亮點(diǎn)為本產(chǎn)品采用一款我公司自主研發(fā)的高效連接酶Fast T4 DNA ligase。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina^®與MGI^®測(cè)序平臺(tái)適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)。

本產(chǎn)品已與Hieff NGS® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫構(gòu)建，通過Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。

本產(chǎn)品已與Hieff NGS® Ultima Endprep Mix（Cat#12605）、2×Ultima HF Amplification Mix for MGI®（Cat#13344）共同用于DNA文庫構(gòu)建，通過MGI®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。

本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量與功能驗(yàn)證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		12604ES24	12604ES96	12604ES98
12604-A	Fast T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL	4.8 mL
12604-B	5×Fast Ligation Buffer	480 μL	2 × 960 μL	2 × 9.6 mL

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，效期一年。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法
1. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表1列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。

表1 . 500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩爾比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩爾比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應(yīng)15分鐘即可。

表2 . Adapter Ligation體系

名稱	體積（μL）
dA-tailed DNA	60
5×Fast Ligation Buffer	20*
Fast T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	X**
ddH2O	To 100

【注】：*對(duì)于5×Fast Ligation Buffer，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。

**根據(jù)自身需求加入適量的接頭。

【接頭添加計(jì)算舉例】：當(dāng)Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？

第一步，計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；

Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)注意事項(xiàng)三表2查詢接頭添加比例

根據(jù)表2，查得Input DNA 100ng時(shí)接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；

接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

綜上，接頭可添加3.4 μL，加1.6 μL水補(bǔ)齊至5 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）

 

HB210810