產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
MolPure® Micro DNA Kit采用MolPure® DNA Column M3和新型的溶液體系，適用于從微量血液、法醫(yī)材料、干血點、藥簽、口香糖、尿液等微量樣品中快速地提取基因組DNA。提取過程不需要用到有毒的酚氯仿等有機物抽提，也不需要用到耗時的乙醇沉淀。操作簡便，可在30 min內(nèi)完成單個樣品的DNA提取和純化工作。試劑盒內(nèi)的MolPure® DNA Column M3可選擇性吸附核酸，不吸附蛋白質(zhì)、多糖和其它非核酸類物質(zhì)，得到的DNA純度高，可直接用于PCR、qPCR等實驗。
試劑盒組分
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類別 |
編號 |
組分名稱 |
18780ES50 (50 T) |
18780ES70 (200 T) |
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Part I |
18780-A |
Proteinase K (20 mg/mL) |
1 mL |
1 mL× 4 |
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18780-B |
Carrier RNA |
200 μL |
800 μL |
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Part II |
18780-C |
DNA吸附柱M3 (MolPure® DNA Column M3) |
50個 |
200個 |
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18780-D |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3) |
50個 |
200個 |
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18780-E |
裂解液LB (LB Buffer M3) |
11 mL |
44 mL |
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18780-F |
結(jié)合液BD (BD Buffer M3) |
15 mL |
60 mL |
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18780-G |
去蛋白液PL (PL Buffer M3) |
25 mL |
100 mL |
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18780-H |
漂洗液W* (Wash Buffer*) |
13 mL |
50 mL |
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18780-I |
洗脫液 (Elution Buffer) |
10 mL |
20 mL |
運輸與保存方法
Part I組分冰袋運輸，-20℃保存。Part II組分常溫運輸，常溫保存。產(chǎn)品有效期12個月。
注意事項
1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
2. 結(jié)合液BD和去蛋白液PL低溫時可能析出，可37℃溫浴復(fù)溶至溶液澄清，不影響使用效果。
3. 結(jié)合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
實驗前準備
1. 自備設(shè)備和試劑：臺式離心機、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴，100%無水乙醇，液氮（組織研磨用），1.5 mL離心管等。
2. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用可以達到12,000 rpm轉(zhuǎn)速的傳統(tǒng)臺式離心機。
3. 首次使用前，在漂洗液W*瓶中加入4倍體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。如果發(fā)現(xiàn)由于運輸或保管不當造成容量嚴重不準，請用量筒定容后再加入指定體積的無水乙醇。每次使用后蓋緊瓶蓋，保持瓶中的乙醇含量。
4. Carrier RNA使用方法：如果起始處理量很少，我們推薦使用Carrier RNA，如果預(yù)期有較大量核酸產(chǎn)量，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入Carrier RNA。使用時在每個樣品提取所需結(jié)合液BD中加入4 μL Carrier RNA儲存溶液， 將結(jié)合液BD與Carrier RNA溶液充分顛倒混勻即可（結(jié)合液BD容易起泡沫，請勿使用渦旋振蕩混勻）。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的結(jié)合液BD中加入總共需要的Carrier RNA混勻備用?；旌弦涸谑覝?/span>24小時內(nèi)穩(wěn)定。
操作方法
一、樣本預(yù)處理：
1. 血液樣本
1）取10-100 μL血液至1.5 mL離心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
【注】：不足100 μL時，需用裂解液LB補足。
2）加入100 µL結(jié)合液BD，充分混勻，70℃放置10 min。
【注】：若預(yù)期DNA含量較低，建議在100 μL結(jié)合液BD中加入1 μL Carrier RNA儲存溶液。
3）冷卻后，加50 µL無水乙醇（自備，預(yù)冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內(nèi)壁液滴。
4）室溫（15-25℃）放置3 min。
2. 血卡類樣本
1）打孔機取2-3個3 mm直徑的血卡紙片至1.5 mL離心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。
【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。
3）加入200 µL結(jié)合液BD，充分混勻。
4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖10 min。
【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中10 min，期間每隔3 min渦旋振蕩10 sec。
3. 微量組織
1）取微量組織（< 10 mg）至1.5 mL 離心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
2）放置于56℃水浴鍋或金屬浴中 1 h至溶液變清亮，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。
3）加入200 µL結(jié)合液BD，充分混勻。
【注】：若預(yù)期DNA含量較低，建議在200 μL結(jié)合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。
4）冷卻后，加200 µL無水乙醇（自備，預(yù)冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內(nèi)壁液滴。
5）室溫（15-25℃）放置5 min。
4. 口香糖
1）取30 mg 口香糖至1.5 mL離心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖3 h。
【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中3 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。
3）加入200 µL結(jié)合液BD，充分混勻。
【注】：若預(yù)期DNA含量較低，建議在200 μL結(jié)合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。
4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。
【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。
5）冷卻后，加200 µL無水乙醇（自備，預(yù)冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內(nèi)壁液滴。
6）1,2000 rpm離心5 min，收集上清液。
5. 法醫(yī)檢材
1）煙頭：取1 cm2 煙頭，切成6塊轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
毛發(fā)：剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛發(fā)，轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液（自備），立刻渦旋振蕩充分混勻。
2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。
【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。
3）加入200 µL結(jié)合液BD，充分混勻。
【注】：若預(yù)期DNA含量較低，建議在200 μL結(jié)合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。
4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。
【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。
5）1,2000 rpm離心5 min，收集上清液。
二、DNA提取：
1. 將DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中，備用。
2. 將上述樣本預(yù)處理液加入DNA吸附柱M3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉廢液。
【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。
3. 加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm離心30 sec，棄廢液。
4. 加入600 µL漂洗液W*，12,000 rpm室溫離心30 sec，棄廢液。
【注】：確保漂洗液W*已添加無水乙醇。
5. 重復(fù)一遍步驟4。
6. 將DNA吸附柱M3放回收集管，空柱12,000 rpm室溫離心2 min，以除去殘留的漂洗液W*。
7. 將DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL離心管中，在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脫液，室溫放置2 min。然后12,000 rpm離心1 min。收集濾液，即為DNA溶液。
【注】：可通過以下方式提高回收產(chǎn)量：①70℃預(yù)熱洗脫液；②將DNA濾液再次上柱，室溫放置2 min后，洗脫。
8. DNA溶液可置于-20℃長期保存。
HB220812
