何為內(nèi)參抗體、何為標(biāo)簽抗體？

一、內(nèi)參抗體

內(nèi)參即內(nèi)部參照（Internal Control），類似于熒光定量實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參基因，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們?cè)诓煌M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，常用它作為檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平變化時(shí)來(lái)做參照物。

 

1. 內(nèi)參抗體的功能：

（1）檢測(cè)整個(gè)WB流程是否正常

（2）檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物是否正確

（3）比較表達(dá)產(chǎn)物微量的相對(duì)變化

（4）評(píng)價(jià)各個(gè)上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致

2. 內(nèi)參抗體的選擇：

（1） 樣本種屬來(lái)源

l 哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、NaK、Atpase等。

l 植物來(lái)源實(shí)驗(yàn)樣本，則可以選擇plant actin、Rubisco等。

l 根據(jù)來(lái)源樣本選擇不同的內(nèi)參，是WB實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。也可參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

（2）目的蛋白分子量

選擇內(nèi)參抗體時(shí)，應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小。通常應(yīng)該保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量為45 KD，此時(shí)不適宜選擇β-actin（43 KD）作為內(nèi)參，可以考慮選擇GAPDH或者β-tubulin作為內(nèi)參。

（3）內(nèi)參蛋白的表達(dá)部位

圖1. 不同部位內(nèi)參蛋白展示圖

二、標(biāo)簽抗體

標(biāo)簽抗體的組成一般分為蛋白標(biāo)簽和目的蛋白兩部分。標(biāo)簽抗體的合成主要是將蛋白標(biāo)簽是利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一起融合表達(dá)的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達(dá)、檢測(cè)、示蹤和純化等。標(biāo)簽抗體（Tag Antibody）可用于檢測(cè)和純化各種商品化表達(dá)載體上的標(biāo)簽序列，分析目的蛋白的表達(dá)含量及其功能。其原理是抗原—抗體反應(yīng)，這些標(biāo)簽抗體可以高度特異地結(jié)合對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽融合蛋白。

標(biāo)簽抗體的選擇可遵循以下原則：

l 檢測(cè)蛋白A+His標(biāo)簽，選擇抗His抗體；檢測(cè)蛋白B+MBP標(biāo)簽，選擇抗MBP抗體；

標(biāo)簽抗體是開(kāi)展基因蛋白表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因功能研究的常用工具。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，相繼開(kāi)發(fā)得到具有各種不同功能的蛋白標(biāo)簽，常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽有His、Flag、GST、MBP、HA、Myc、GFP 等。

表1. 不同標(biāo)簽功能介紹

融合標(biāo)簽	大?。↘D）	功能	是否切除
HIS	0.84	有利純化，能純化可溶性/包涵體蛋白	小標(biāo)簽，不影響蛋白功能
GST	26	增強(qiáng)可溶性，僅能純化可溶性蛋白	大標(biāo)簽，需切除
MBP	44.4	增強(qiáng)可溶性，減弱毒性蛋白	大標(biāo)簽，需切除
NusA	55	增強(qiáng)可溶性，減弱毒性蛋白	大標(biāo)簽，需切除
SUMO	11.2	增強(qiáng)可溶性，減弱毒性蛋白	大標(biāo)簽，需切除

三、翌圣標(biāo)簽抗體與內(nèi)參抗體
 

標(biāo)簽抗體

貨號(hào)	名稱	分子量	應(yīng)用	WB稀釋比例	價(jià)格（元）
30503ES20	Flag-Tag, Mouse mAb	20μl	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	248
		100μl	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	748
		1ml	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	3287
		5ml	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	13687
30401ES50	His-tag, Mouse mAb	50µl	ELISA, IF, WB, IP	1:2000-1:20000	688
30601ES60	Myc-tag, Mouse mAb	100μl	ELISA, IF, IP, WB	1:5000	748
30701ES60	HA-Tag, Mouse mAb	100μl	WB, IP	1:10000	748
30901ES50	GST-tag, Mouse mAb	50μl	ELISA, WB, IP	1:5000-50000	688

 

內(nèi)參抗體

貨號(hào)	名稱	規(guī)格	應(yīng)用	WB稀釋比	價(jià)格（元）
30101ES50	β-actin, Mouse mAb	50 µl	ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP	1:5000-50000	688
30102ES60	β-actin, Rabbit pAb	100 ul	ELISA, IF, WB, IHC	1:1000-10000	998
30201ES60	GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb	20 µl	ELISA, IF, WB, IHC	1:10000	738
30202ES60	GAPDH, Rabbit pAb	100 ul	WB	1:2000	588
30301ES60	β-Tubulin, Mouse mAb	100 µl	IF, WB, IHC ,IP	1:1000	948
30302ES60	β-Tubulin, Rabbit pAb	100 µl	IF, IHC, IP	1:5000-10000	748
30304ES60	α-Tubulin, Rabbit pAb	100 µl	WB, IF, IHC, IP	1:5000-10000	948

 其他常用內(nèi)參類型推薦

貨號(hào)	名稱	分子量	品牌
細(xì)胞核膜	Lamin A/C	65-75 KD	咨詢購(gòu)買
	Lamin B1	66-72 KD
細(xì)胞核	YY1	65-70 KD
	TBP	33-43 KD
	Histone H3	15-17 KD
	PCNA	36 KD
胞漿或全細(xì)胞	GAPDH	36 KD
	β-actin	42 KD
	Vinculin	117 KD
	β-Tubulin	50-55 KD
	α-Tubulin	50-55 KD
膜蛋白	ATP1A1	97-110 KD
線粒體	COX412	17-20 KD
	COX411	17-20 KD
	Porin	31-37 KD
全血/血漿/血清	Albumin	66 KD

 

四、標(biāo)簽抗體標(biāo)記的蛋白純化產(chǎn)品

1. Anti-Flag親和純化凝膠 

    Anti-Flag親和純化凝膠由高質(zhì)量的鼠源 IgG2b單克隆抗體與Sepharose 4B gel 通過(guò)供價(jià)偶聯(lián)制備，本產(chǎn)品具有較高的Flag標(biāo)簽融合蛋白加載容量（至少為1.1mg protein/ml gel），雜蛋白非特異結(jié)合少，可用于蛋白質(zhì)免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)純化。

Anti-Flag親和純化凝膠可結(jié)合Met修飾的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag 融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag 融合蛋白（Protein-FLAG）。

圖2. Anti-Flag親和純化凝膠IP后蛋白電泳圖

1, 國(guó)外品牌  2,Yeasen；抗體濃度：7.5mg抗體/ml凝膠；蛋白結(jié)合量：1.25mg蛋白/mL凝膠；蛋白純度：＞95%

圖3. 不同品牌Flag凝膠價(jià)格比對(duì)圖

貨號(hào)	名稱	規(guī)格	價(jià)格
20585ES03	Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag親和純化凝膠）	1ml	1487
20585ES08		5ml	4797
20585ES25		25ml	20987
20585ES60		100ml	76187

2. 瓊脂糖凝膠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體

瓊脂糖凝膠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體由高質(zhì)量的鼠源單克隆抗體與Sepharose 4B gel 通過(guò)供價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的標(biāo)簽融合蛋白加載容量，雜蛋白非特異結(jié)合少，可用于蛋白質(zhì)免疫共沉淀和少量蛋白質(zhì)純化。 

貨號(hào)	名稱	規(guī)格	價(jià)格（元）
20586ES03/08	Anti-HA Affinity Gel （Anit-HA親和純化凝膠）	1ml/5ml	1487/4797
20586ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20587ES03/08	Anti-Myc Affinity Gel （Anti-Myc標(biāo)簽親和純化凝膠）	1ml/5ml	1487/4797
20587ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20588ES03/08	Anti-V5 Affinity Gel （Anti-V5標(biāo)簽親和純化凝膠）	1ml/5ml	1487/4797
20588ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20589ES03/08	Anti-His Affinity Gel （Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠）	1ml/5ml	1487/4797
20589ES25/60		25ml/100ml	20987/76187

 3. 標(biāo)簽多肽

     蛋白標(biāo)簽是指利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一起融合表達(dá)的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達(dá)、檢測(cè)、示蹤和純化等。Yeasen公司推出的標(biāo)簽多肽可用于與帶有相應(yīng)標(biāo)簽的蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合anti-標(biāo)簽單抗，以達(dá)到純化標(biāo)簽融合蛋白的目的。

貨號(hào)	名稱	規(guī)格	價(jià)格（元）
20571ES11/25	3X Flag-tag Peptide （3X Flag-tag重復(fù)多肽）	4mg/25mg	2157/9537
20572ES11/25	Flag-tag Peptide （Flag-tag多肽）	4mg/25mg	1237/5587
20573ES08/25	c-Myc Tag Peptide（c-Myc Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20574ES08/25	HA Tag Peptide（HA Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20575ES08/25	V5 Tag Peptide（V5 Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20576ES08/25	6X His Tag Peptide（6X His Tag多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20577ES08/25	S-Tag (Pancreatic RNase A derivtive) Peptide（S-Tag 多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20578ES08/25	T7 Tag Peptide（T7 Tag多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20579ES08/25	VSV-G Tag Peptide（VSV-G Tag多肽）	5mg/25mg	2157/9537
20580ES08/25	X-press Tag Peptide（X-press Tag多肽）	5mg/25mg	2157/9537

 

HB200525