疏水層析的原理
疏水層析是根據(jù)物質(zhì)的疏水性質(zhì)進(jìn)行分離的技術(shù)。蛋白疏水性取決于表面的氨基酸殘基帶的疏水基團(tuán)多少和強(qiáng)弱。
除了通過(guò)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)來(lái)預(yù)測(cè)蛋白的疏水性以外，我們還可根據(jù)蛋白開(kāi)始鹽析沉淀的鹽濃度為基礎(chǔ)來(lái)評(píng)價(jià)蛋白的相對(duì)疏水性。
圖1是用四種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)在瓊脂糖苯基高分辨率介質(zhì)上的層析圖譜應(yīng)用舉例。與幾乎所有的色譜圖一樣，左側(cè)的垂直軸顯示的是UV吸收值，通過(guò)鹽濃度的變化可以實(shí)現(xiàn)四種蛋白的完全分離，如果考慮它們的三級(jí)結(jié)構(gòu)，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)疏水性弱的蛋白質(zhì)會(huì)最后被洗脫下來(lái)。
圖1.圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)
疏水層析的影響因素
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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類型 |
Agarose FF |
Agarose 4 FF |
Agarose HP |
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基架 |
6%的高度交聯(lián)的瓊脂糖 |
4%的高度交聯(lián)的瓊脂糖 |
6%的高度交聯(lián)的瓊脂糖 |
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配基 |
Phenyl |
Butyl |
Phenyl或Butyl |
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粒徑 |
45-165 µm |
45-165 µm |
25-45 µm |
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用途 |
捕獲、中度純化 |
大孔設(shè)計(jì)主要針對(duì)大分子純化 |
中度、精細(xì)純化，高分辨率 |
產(chǎn)品應(yīng)用
純化步驟
測(cè)試結(jié)果
填料：5mL翌圣Butyl Agarose 4FF&其它品牌對(duì)應(yīng)產(chǎn)品樣品：發(fā)酵液上清進(jìn)行SP強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱純化后樣品加入1.5M硫酸銨，pH3.5
樣品加載：20mL
起始緩沖液A：20mM醋酸鈉+1.5M硫酸銨 PH3.5
洗脫緩沖液B：20mM醋酸鈉 pH3.5
流速：3mL/min
圖2.翌圣Butyl Agarose 4FF純化峰圖
優(yōu)勢(shì)：峰較高且分辨率較高。
圖3.其它品牌純化峰圖
常見(jiàn)問(wèn)題
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問(wèn)題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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蛋白聚集 |
鹽濃度太高 |
降低鹽濃度 |
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介質(zhì)的疏水性太弱 |
選用疏水性強(qiáng)的層析介質(zhì) |
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洗脫收率低 |
介質(zhì)的疏水性太強(qiáng) |
選擇疏水性弱的層析介質(zhì) |
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選擇的鹽不適合 |
選擇摩爾表面張力低的鹽 |
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結(jié)合載量低 |
鹽濃度偏低 |
增加鹽濃度，選擇強(qiáng)結(jié)合的鹽 |
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層析介質(zhì)的疏水性弱 |
選擇強(qiáng)疏水性的介質(zhì)或降低上樣過(guò)程的流速 |
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洗脫峰展寬 |
層析介質(zhì)疏水性太強(qiáng) |
選擇弱結(jié)合的鹽或?qū)游鼋橘|(zhì)，或者降低洗脫流速 |
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重復(fù)性不佳 |
忽略了溫度的影響 |
檢查實(shí)驗(yàn)室、清潔室、溶液的溫度以及層析柱是否需要存放在冷室中 |
訂購(gòu)信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
價(jià)格（元） |
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20478ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Butyl 4FF Chromatography Column, 5 mL（Butyl 4FF弱疏水層析預(yù)裝柱，5 mL） |
20479ES08 |
5 mL |
600 |
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20480ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Phenyl FF(HS) Chromatography Column, 5 mL（Phenyl FF(HS)強(qiáng)疏水層析預(yù)裝柱，5 mL） |
20481ES08 |
5 mL |
600 |
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20482ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
600/1500/7000 |
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Phenyl FF(LS) Chromatography Column, 5 mL（Phenyl FF(LS)強(qiáng)疏水層析預(yù)裝柱，5 mL） |
20483ES08 |
5 mL |
600 |
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20484ES25/60 |
25mL/100mL |
800/2000 |
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Butyl HP Chromatography Column, 5 mL（Butyl HP弱疏水層析預(yù)裝柱，5 mL） |
20485ES08 |
5 mL |
700 |
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20486ES25/60 |
25mL/100mL |
800/2000 |
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Phenyl HP Chromatography Column, 5 mL（Phenyl HP強(qiáng)疏水層析預(yù)裝柱，5 mL） |
20487ES08 |
5 mL |
700 |
