疏水作用層析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）是利用生物分子所帶有的疏水基團(tuán)和固定相上的疏水配基之間的相互作用來分離物質(zhì)的一種層析方法，鹽離子可以破壞生物分子表面的水化膜，促進(jìn)疏水基團(tuán)和配基之間的結(jié)合。

本品Phenyl Agarose FF(HS)是一種高取代的芳香族疏水層析介質(zhì)，它是在 6%的瓊脂糖基架上偶聯(lián)苯基而成的，結(jié)合載量較高，配基疏水性強(qiáng)，適合疏水性較弱的生物分子的分離純化。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	6%的高度交聯(lián)的瓊脂糖
粒徑	45-165 µm
功能基團(tuán)	苯基
載量	30 mg lgG 或 36 mg HSA/mL
建議流速	300-600 cm/h
pH范圍	3-13
儲(chǔ)存緩沖液	20%乙醇

 

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4-30℃保存，有效期4年。

 

注意事項(xiàng)

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1 緩沖液的準(zhǔn)備

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。

2）結(jié)合緩沖液通常選用含有高濃度鹽的磷酸鹽緩沖液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脫緩沖液通常選用不含其他鹽類的磷酸鹽緩沖液，如50 mM PB，pH7.0，對(duì)于較難洗脫的物質(zhì)可以采用純水，或者在純水中加入低濃度乙醇作為洗脫液。

注：需要根據(jù)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（目的物是否有沉淀、目的物的結(jié)合強(qiáng)弱、回收率、分離度等） 對(duì)結(jié)合緩沖液中的鹽的濃度和類型進(jìn)行調(diào)整。

 

2 樣品準(zhǔn)備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。需要將樣品的 pH 和電導(dǎo)率調(diào)整到與結(jié)合緩沖液一致。

 

3 樣品純化

1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出儲(chǔ)存緩沖液，然后用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(HS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。

 

4 填料清洗

疏水層析填料每次使用后可以分別用2-3倍柱體積的30%異丙醇（70%乙醇）、3倍柱體積的純化水沖洗層析柱，然后用至少3倍柱體積的平衡液進(jìn)行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

疏水層析填料可以重復(fù)使用，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)樹脂進(jìn)行清洗。

1）先用2個(gè)柱體積的純化水沖洗掉結(jié)合比較緊的蛋白。

2）對(duì)于強(qiáng)疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3個(gè)柱體積1M NaOH清洗，然后立即用5~10個(gè)柱體積純水沖洗。

3）脂蛋白和脂類物質(zhì)的去除：先用5~10個(gè)柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，后用5~10個(gè)柱體積純水沖洗。

4）也可將上述兩種清洗條件結(jié)合進(jìn)行清洗，即用含有1M NaOH的30%異丙醇溶液清洗。

HB220815