產(chǎn)品描述

CFDA, SE，英文全稱Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。 

CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具細(xì)胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群落分析。

CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀（FL1通道）根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2的熒光強(qiáng)度），二次（1/4的熒光強(qiáng)度），三次（1/8的熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFSA，SE可檢測分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測，也可用于成纖維細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測。

CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，Ex=494 nm，Em=521 nm，除了流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。本品以粉末形式提供，需用DMSO制備儲存液后再使用。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

中文名稱（Chinese Synonym）	5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
英文名稱（English Synonym）	5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester
CAS號（CAS NO.）	150347-59-4
分子式（Molecular Fomular）	C29H19NO11
分子量（Molecular Weight）	557.46
純度（Purity）	≥94%（HPLC）
外觀（Appearance）	類白色固體
Ex/ Em	494/521 nm
結(jié)構(gòu)式（Structure）

 

運(yùn)輸與保存

室溫運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。避免反復(fù)凍融。

 

注意事項

1）不同的細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

2）熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

3）為了您的健康，實(shí)驗操作時請穿實(shí)驗服和帶一次性手套。

 

操作方法

1. CFSE儲存液（5 mM）的配制

用1 mL DMSO溶解2.79 mg CFSE，充分混勻即得到5 mM的儲存液（1 mg/ml的CFSE溶液濃度相當(dāng)于其摩爾濃度1.8 mM）。

【注意】該儲存液需立即使用，根據(jù)使用量計算如有剩余請務(wù)必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融。

2. CFSE工作液（0.5-5µM）的配制

使用前用含20 mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0）對上述CFSE 儲存液進(jìn)行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

3. 操作方法

【注意】：以下是針對活細(xì)胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行細(xì)胞藥物處理，適當(dāng)調(diào)整實(shí)驗步驟。

1）離心收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1-5×10⁵個/管；

2）用500 µL CFSE工作液懸浮細(xì)胞，于室溫或37℃避光孵育10-30 min；

3）吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細(xì)胞，用500 µL預(yù)熱HHBS或培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞；

4）在Ex/Em=490/520 nm下用流式細(xì)胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

HB220915