ATP是細(xì)胞內(nèi)最重要的能量分子，可以用來衡量細(xì)胞新陳代謝水平，并與活細(xì)胞數(shù)目具有良好的線性關(guān)系，因此，可通過ATP含量反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目。本試劑盒借ATP依賴的熒光素酶催化的熒光素發(fā)光反應(yīng)，通過化學(xué)發(fā)光信號測定細(xì)胞內(nèi) ATP含量，從而檢測細(xì)胞活力或定量檢測活細(xì)胞數(shù)目，靈敏度高、線性范圍寬。本試劑盒兼容少量樣品檢測以及大量樣品的高通量篩選檢測。

本試劑盒提供的發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑線性范圍寬、靈敏度高、穩(wěn)定性好。96孔板中，在100個至100,000個細(xì)胞范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，但不同細(xì)胞的檢測數(shù)量上限會有不同。此外，操作簡單，試劑盒中提供的檢測試劑為即用型，讀數(shù)穩(wěn)定，檢測速度快，完成檢測僅需約10 min，無需洗滌細(xì)胞，也無需更換或去除培養(yǎng)液。相比于其他常見的細(xì)胞活力測定方法，如Calcein-AM、CCK-8等，發(fā)光法細(xì)胞活力檢測更加簡單快捷。

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20 ºC避光保存，有效期3年。 

 

注意事項

1）試劑中含有熒光素酶，反復(fù)凍融會影響其活性。建議分裝后置于-20 ℃避光保存。
2）試劑及細(xì)胞樣品使用前均需平衡至室溫，以避免酶催化效果的影響。
3）藥物含量較高時可能會干擾熒光素酶反應(yīng)，從而影響化學(xué)發(fā)光信號。建議設(shè)置含有藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液照孔以排除溶劑的干擾。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅供科研使用。

 

使用方法

一、細(xì)胞培養(yǎng)

使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測的96孔板，每孔接種100 μL細(xì)胞（根據(jù)培養(yǎng)時間確定初始接種的細(xì)胞密度，檢測時每孔細(xì)胞數(shù)量不宜超過10萬個），同時設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液的孔作為陰性對照。37 ℃，5 % CO₂培養(yǎng)細(xì)胞。也可以設(shè)置細(xì)胞的濃度梯度，以得到最佳的實驗結(jié)果。根據(jù)需要在合適的時間加藥處理細(xì)胞。

 

二、（可選）ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

把自備的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用 PBS稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻龋?/span>96孔板每孔加入100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品。

 

三、細(xì)胞活力檢測

1. 融解凍存的發(fā)光法檢測試劑，并平衡至室溫；

2. 取出細(xì)胞培養(yǎng)板，室溫平衡10 min；
3. 96孔板每孔加入100 μL檢測試劑（由于孔的邊緣效應(yīng)，可能會導(dǎo)致發(fā)光信號不穩(wěn)定，不建議在邊緣鋪板）；
4. 室溫振蕩2 min，以促進(jìn)細(xì)胞的裂解；
5. 室溫放置10 min，使發(fā)光信號趨于穩(wěn)定；
6. 使用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，檢測波長560 nm。根據(jù)儀器要求設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)，每孔的檢測時間一般為0.25-1 s，具體需根據(jù)儀器的檢測靈敏度進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；
7. 根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)計算細(xì)胞的相對活力，或根據(jù)ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線計算ATP含量從而得出細(xì)胞的相對活力。

【注】：檢測效果因細(xì)胞的種類不同而異，對于一些ATP含量特別高的細(xì)胞，在細(xì)胞數(shù)量達(dá)到100,000以上可能會出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)繼續(xù)升高，但喪失線性關(guān)系。

HB220913