產(chǎn)品簡介

 

Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix是即用型2×預(yù)混溶液，包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase，dNTP以及對高通量測序文庫擴(kuò)增而精心優(yōu)化的緩沖體系，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、保真性好等優(yōu)點(diǎn)。在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)，體系只需加入引物和模板即可，簡化了實(shí)驗(yàn)操作步驟，減少了人為誤差，提高了實(shí)驗(yàn)通量和結(jié)果的重復(fù)性。本產(chǎn)品提供是所有試劑組分均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)檢，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能和批次間穩(wěn)定性。

 

儲存條件

 

-25~-15℃保存，有效期18個(gè)月。

 

使用說明

 

使用說明正文

1. 文庫擴(kuò)增反應(yīng)體系（冰上配制）

1. 將表1中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于無菌PCR管中配制表1所示反應(yīng)體系。

 

表1. PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系

組分	體積 (µL)
模板DNA	X
正向引物 (10-25 μM）	1-2.5
反向引物 (10-25 μM）	1-2.5
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix	25
ddH2O	Total to 50

3. 使用移液器輕輕吹打貨震蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底。
4. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表2所示反應(yīng)程序，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

 

 

表2. PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序

溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	1-15（根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求）
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	-

【注】：

1)預(yù)變性溫度推薦使用98°C。預(yù)變性推薦時(shí)間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；文庫為1 min；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。

2) 退火溫度推薦使用60°C，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。

3) 延伸溫度和時(shí)間：推薦使用72°C，延伸時(shí)間根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行調(diào)整。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240808