DNA甲基化與基因表達和基因功能密切相關，高效、準確地檢測DNA甲基化對于生物學、遺傳學、病理學、藥理學、醫(yī)療診斷等多方面研究已經(jīng)變得越發(fā)重要。最常用的檢測DNA甲基化的方法是亞硫酸氫鹽轉化法。亞硫酸氫鹽能轉化未發(fā)生甲基化的胞嘧啶，通過脫氨基反應產生尿嘧啶磺酸鹽，發(fā)生甲基化的胞嘧啶則不會被亞硫酸氫鹽轉化。轉化后的DNA經(jīng)過高效吸附核酸的磁珠結合，再通過洗滌、脫硫和洗脫等步驟富集得到磁珠上的DNA。

本試劑盒將DNA變性與亞硫酸氫鹽轉化合并為一步，轉化反應時間需2.5 h；DNA投入量范圍100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶轉化效率≥99.5%。轉化后的產物適用于PCR擴增和NGS測序等下游應用。

 

組分信息

類別	組分編號	組分名稱	12223ES10	12223ES50	12223ES70
Part Ⅰ	12223-A	轉化液	1.2 mL×1	1.2 mL×5	1.2 mL×20
Part Ⅱ	12223-B	結合液	6.5 mL	32 mL	122 mL
	12223-C	脫硫液	2.2 mL	12 mL	42 mL
	12223-D	洗滌液	2.5 mL	12.5 mL	50 mL
	12223-E	洗脫液	1 mL	5 mL	20 mL
	12223-F	磁珠懸浮液	0.12 mL	0.6 mL	1.3 mL×2

注：10T：使用前洗滌液(12223-D)每瓶需加入10 mL無水乙醇

50T：使用前洗滌液(12223-D)每瓶需加入50 mL無水乙醇

200T：使用前洗滌液(12223-D)每瓶需加入200 mL無水乙醇

 

儲存條件

Part Ⅰ組分2~8℃保存；Part Ⅱ組分常溫保存。有效期12個月。

 

使用說明

手動操作說明

1. 轉化

1. 取出110 μL轉化液于200 μL PCR管(八連管)中，加入40 μL DNA樣本（若不足40 μL可用水補足），蓋上管蓋后，震蕩混勻，瞬時離心，管蓋上不要殘留液體。
2. 將PCR管（八連管）放入PCR儀，執(zhí)行如下程序：

溫度	時間
熱蓋105 ℃	On
98 ℃	10 min
64 ℃	2.5 h
4 ℃	不超過20h

2. 純化

1. 轉移轉化后的DNA溶液到1.5 mL離心管中，加入600 μL結合液和10 μL磁珠， 1300~1500 rpm振蕩30s；
2. 室溫孵育5 min后置于磁力架上進行磁分離至溶液完全澄清，使用槍頭小心吸棄上清；
3. 向離心管中加入400 μL洗滌液，1300~1500 rpm振蕩30 s，置于磁力架上進行磁分離至溶液完全澄清，輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落，瞬離，吸棄上清液；
4. 向離心管中加入200 μL脫硫液，1300~1500 rpm振蕩30 s，室溫孵育15 min，置于磁力架上進行磁分離至溶液完全澄清，輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落，瞬離，吸棄上清液；
5. 向離心管中加入400 μL洗滌液，1300~1500 rpm振蕩30 s，置于磁力架上進行磁分離至溶液完全澄清，輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落，瞬離，吸棄上清液，重復本步驟一次；
6. 將離心管轉移至55 ℃金屬浴孵育5~10 min，將磁珠完全晾干；

【注】：此步驟非常關鍵，請務必保證完全干透但磁珠不干裂！

7. 加入35 μL左右洗脫液到磁珠中，1300~1500 rpm振蕩30 s將磁珠重懸于洗脫液中，金屬浴55 ℃加熱5 min后置于磁力架上進行磁分離，回收上清液（即轉化后的DNA溶液）；

【注】：ddH₂O也可進行洗脫；洗脫體積可根據(jù)實驗需求相應調整。

8. 洗脫的DNA溶液可以直接用于下游反應，或者保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/font>

 

注意事項

1. 轉化液避免反復開蓋，多次開蓋可能影響轉化效果，開蓋使用后立即擰緊瓶蓋。

2. 洗滌液首次使用時，需按標簽注明的體積添加無水乙醇。

3. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取洗脫液時應盡量避免吸入磁珠。

4. 磁珠使用前需要用渦旋混勻器振蕩混勻。

5. 需自備無水乙醇

6. 本產品僅作科研用途。

7.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

產品性能