Hieff^® 5'App T4 DNA Ligase可以特異性地將DNA預(yù)腺苷酸化的5’末端連接到DNA的3’末端，該酶連接不需要ATP，但是需要預(yù)腺苷酸化底物。與常規(guī)T4 DNA Ligase不同，5'App T4 DNA Ligase不能將底物的5’端腺苷酸化，因此它不能將磷酸化DNA的5’端連接到DNA的3’末端。該酶非常適用于NGS建庫過程中DNA片段和5’預(yù)腺苷酰酸化接頭的連接，可以顯著減少片段自連（嵌合體形成）。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		14960ES60 （100 KU）	14960ES70 （200 KU）
14960-A	Hieff® 5'App T4 DNA Ligase (2000 U/μL)	50 μL	100 μL
14960-B	5× T4 DNA Ligase Buffer	200 μL	500 μL

 

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸，-25~-15°C保存，有效期1年。

 

注意事項(xiàng)

1. Buffer在溶解時(shí)，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請顛倒混勻后使用。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途! 

 

使用方法

與腺苷酸化接頭的連接

1.  將所需試劑解凍后顛倒混勻，瞬時(shí)離心收集，置于冰上備用。

2. 在PCR管中配置以下反應(yīng)體系（確保在冰上操作），使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，瞬時(shí)離心收集。

名稱	體積 (μL)
DNA片段	20
5× T4 DNA Ligase Buffer	6
App-Adapter	2
Hieff® 5'App T4 DNA Ligase (2000 U/μL)	2
Total	30

【注】：此體系即適用于平末端片段也適用于粘性末端片段的連接。

3. 將上述PCR管置于PCR儀，按照以下反應(yīng)程序進(jìn)行App接頭連接

溫度	時(shí)間
熱蓋105°C	Off
20°C	15 min
4°C	Hold

HB23010