產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫過程中DNA片段和接頭連接的單酶產(chǎn)品，該產(chǎn)品已經(jīng)過高通量測
序驗(yàn)證，質(zhì)量優(yōu)異。本酶具有高效的連接能力，兼容各類樣本，對(duì)于復(fù)雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接更顯優(yōu)勢，比如華大平臺(tái)的Bubble接頭，均可得到優(yōu)異的測序質(zhì)量。
產(chǎn)品組分
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
規(guī)格 |
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10298ES40 |
10298ES42 |
10298ES08 |
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10298-A |
Hieff® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
100 µL |
1 mL |
5 mL |
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10298-B |
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
250 μL |
2×1.25 mL |
10×1.25 mL |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應(yīng)體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí)，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
注意事項(xiàng)
1）Buffer在融解時(shí)，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請(qǐng)顛倒混勻后使用。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
- 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應(yīng)15 min即可。
表1 Adapter Ligation體系
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名稱 |
體積（μL） |
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dA-tailed DNA |
60 |
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10 × T4 DNA Ligase Buffer |
10 |
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50% PEG 6000 |
10* |
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DNA Adapter |
X** |
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Hieff® Novel T4 DNA Ligase |
1-5*** |
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ddH2O |
To 100 |
【注】：*試劑盒內(nèi)未提供50% PEG 6000，需自行準(zhǔn)備。
**接頭用量參考表2。
***Hieff® Novel T4 DNA Ligase用量可根據(jù)需要添加1-5 μL。
- Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表2列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表2 500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
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Input DNA |
Adapter : Input DNA摩爾比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩爾比 |
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1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
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500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
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250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
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100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。
【接頭添加計(jì)算舉例】：當(dāng)Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？
第一步，計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；
Input DNA摩爾數(shù)（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)表2查詢接頭添加比例；
根據(jù)表2，查得Input DNA 100 ng時(shí)接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；
接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
綜上，接頭可添加3.4 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）
HB220621
