產(chǎn)品簡介  

PNGase F (N-糖苷酶 F)是一種酰胺水解酶，經(jīng)過和平空間站伊麗莎菌克隆，主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。翌圣PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)在酵母中重組表達(dá)（比活性：100000 U/mL），可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。本產(chǎn)品帶His標(biāo)簽，常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。

   另外，我司還提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F（快速版）（Cat#20406ES, 可以在數(shù)分鐘內(nèi)對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進(jìn)行徹底和快速的去糖基化），PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他類型的糖苷酶，如Endo H糖苷內(nèi)切酶H（Cat#20414ES），Endo S糖苷內(nèi)切酶S（Cat#20413ES）。

翌圣為您提供蛋白純化實驗整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購請參考：蛋白純化系列產(chǎn)品-選購指南

 

產(chǎn)品信息

編號	組分名稱	組分成分	20407ES01	20407ES02
20407-A	PNGase F	PNGase F	15000 U	75000 U
20407-B1	Buffer 1（10×）	5% SDS; 400 mM DTT	150 μL	750 μL
20407-B2	Buffer 2（10×）	200 mM Tris, PH 7.5	300 μL	1500 μL
20407-B3	10% NP-40	10% NP-40 in MilliQ-H2O	300 μL	1500 μL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名（Chinese synonym）	N-糖酰胺酶F；肽N-糖苷酶 F
英文別名（English synonym）	PNGase F
來源（Source）	酵母重組表達(dá)
分子量（Molecular weight）	36 kDa
比活性（Specific activity）	100000 U/mL
緩沖液組分（Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50% Glycerol
酶活定義（Unit Definition）	1個酶活力單位指在10 μL的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時從10 μg變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用方法

1、變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化：

1）在水中加入1 μL Buffer 1和目標(biāo)糖蛋白（1-20 μg），至終體積10 μL；

2）100℃溫度下煮沸10 min使其變性，冰上冷卻，離心10秒；

3. 加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10％NP-40、6 μL去離子水，總反應(yīng)體積20 μL；
4. 加入1-2 μL的PNGase F，輕輕混勻。在37℃孵育1-3 h。

2、非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化：

1）在水中加入2 μL的Buffer 2和目標(biāo)糖蛋白（1-20 μg）至最終體積為 20 μL。

2）加入 2~5 μL 的 PNGase F, 輕輕混勻。

3）37°C 孵育 4-24 h。

注意：在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化，在非變性條件下可能需要增加PNGase F的量和延長孵育時間。

 

注意事項

1. PNGase F建議搭配我司提供的配套緩沖液使用，按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足，可咨詢當(dāng)?shù)劁N售進(jìn)行購買（Cat#20407-B, 包含20407-B1（750 μL）、20407-B2（1500 μL）、20407-B3（1500 μL））

2. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240614