產(chǎn)品簡(jiǎn)介

PNGase F (N-糖苷酶 F)是一種酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白，特異性除去N-連接糖，但常規(guī)PNGase F酶促反應(yīng)釋放抗體N-聚糖需要長(zhǎng)達(dá)幾小時(shí)，同時(shí)由于聚糖釋放存在偏好性，不完全的去糖基化可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差，所獲得的聚糖分布不能代表治療性抗體的正確組成。因此，盡量在最短時(shí)間內(nèi)獲得準(zhǔn)確的 N-糖鏈糖譜對(duì)于抗體及抗體融合蛋白等生物治療劑生產(chǎn)過(guò)程中糖基化監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。

翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版）是一種經(jīng)過(guò)優(yōu)化的重組試劑,可以在數(shù)分鐘內(nèi)對(duì)抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進(jìn)行徹底和快速的去糖基化。此酶能夠迅速且無(wú)偏好性地去除所有的 N-糖鏈，并且可直接進(jìn)行下游的色譜或質(zhì)譜分析。翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版） 簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，可在保證靈敏度和重復(fù)性的前提下減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

   另外，我司還提供常規(guī)PNGase F，包括酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶 F（Cat#20407ES，比活性：100000 U/mL），酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶 F（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他類型的糖苷酶，如內(nèi)切糖苷酶H（Cat#20414ES），內(nèi)切糖苷酶S（Cat#20413ES）。

 

產(chǎn)品信息

編號(hào)	組分名稱	20406ES20	20406ES50
20406-A	Fast PNGase F	20 μL	50 μL
20406-B	Fast PNGase F Buffer （5×）	80 μL	200 μL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名（Chinese synonym）	N-糖酰胺酶F（快速版）；肽N-糖苷酶 F（快速版）
英文別名（English synonym）	Fast PNGase F
來(lái)源（Source）	酵母重組表達(dá)
緩沖液組分（Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA

 

儲(chǔ)存條件

2~8℃保存，有效期1年，嚴(yán)禁凍存。

 

使用方法

1、一步法蛋白質(zhì)去糖基化：

1）將100 μg的抗體和H₂O混合至16 μL的總體積；

2）加入4 μL的Fast PNGase F Buffer (5x)，使總反應(yīng)體積為20 μL；

3）加入1 μL的Fast PNGase F；

4) 在50°C孵育10分鐘。

 

2、兩步法蛋白質(zhì)去糖基化：

備注：某些抗體（如Fab N-糖基化）需要預(yù)熱步驟來(lái)進(jìn)行高效的脫糖基化

1）將100 μg的抗體和H₂O混合至16 μL的總體積；

2）加入4 μL的Fast PNGase F Buffer (5x)，使總反應(yīng)體積為20 μL；

3）在80°C孵育2分鐘，冷卻至室溫；

4) 加入1 μL Fast PNGase F；

5) 在50°C孵育10分鐘。

 

注意事項(xiàng)  

1. 為了獲得最佳的熱傳導(dǎo)效果，可以使用0.2 mL PCR管或者1.5 mL 薄壁離心管?？梢允褂脦в屑訜嵘w的熱循環(huán)儀或者熱金屬浴進(jìn)行孵育。
2. 推薦進(jìn)行兩步法酶切，可保證更高的酶切效率。
3. 抗體或抗體融合蛋白樣品的儲(chǔ)存體系要與Fast PNGase F活性兼容，由于SDS 抑制Fast PNGase F的酶活，儲(chǔ)存體系不能含有 SDS；常用的穩(wěn)定劑如 Tween、Triton X-100、NP-40、辛基葡糖苷和非去污劑磺基甜菜堿以及少量的有機(jī)溶劑均會(huì)影響最佳的快速去糖基化效率；
4. 75ºC 條件下處理 10 分鐘可以滅活Fast PNGase F。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240605