phi29 DNA polymerase來源于Bacillus subtilis噬菌體，經(jīng)基因工程改造后具有卓越的鏈置換和持續(xù)合成能力，可合成長達(dá)70 kb的DNA片段。此外其3’→5’核酸外切酶校讀活性較強，推薦體系中引物3’末端修飾以防止降解，常用于質(zhì)粒的體外合成和全基因組合成。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		14409ES03	14409ES08	14409ES25
14409	phi29 DNA Polymerase (100 U/μL）	1 mL	5 mL	25 mL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1）全基因組擴增（WGA）；

2）滾環(huán)擴增 (RCA)；

3）多重置換擴增（MDA）。

 

單位定義

1 U指30℃條件下反應(yīng)10 min，能使0.5 pmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀所需的酶量。

 

運輸與保存方法

干冰運輸。-20℃保存，有效期2年。

 

質(zhì)量控制

純度檢測：純度大于95%。

核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA電泳譜帶無變化。

切口酶殘留檢測：100 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA電泳譜帶無變化。

RNase殘留檢測：10 U本品和0.5 μg 293T-RNA，37℃下孵育4 h，DNA電泳譜帶無變化。

 

熱失活

65℃，10 min。

 

注意事項

1. Buffer在融解時，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請顛倒混勻后使用；

2. 本產(chǎn)品僅做科研用途；

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

使用方法（以基因組DNA擴增為例）

1. 反應(yīng)體系配制：

組分	用量
10×phi29 Reaction Buffer（Cat#15442ES）	2 μL
隨機引物	總投入量20-75 μM
dNTPs	總投入量2 mM
基因組DNA	5-50 ng
ddH2O	to 19
phi29 DNA Polymerase (10 U/μL）	10-20 U

2. 反應(yīng)條件：30℃孵育3 h，65℃，10 min失活phi29 DNA polymerase。

HB221129