Exonuclease III是一種核酸外切酶，該酶作用于雙鏈DNA，從3’OH末端方向逐步切去單核苷酸。該酶最適底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對(duì)單鏈DNA無活性，因此該酶難以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性對(duì)底物的消化程度隨3'突出末端的長(zhǎng)度而變化，四堿基或更長(zhǎng)的突出末端難以被切割。這種特

性可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈DNA，將線性化DNA設(shè)計(jì)成為一端為不切割末端（3'突出端），另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端（平端或5'突出端），此時(shí)Exonuclease III將僅消化一條鏈。

Exonuclease III的活性部分依賴DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，并根據(jù)序列的不同而有差異（C＞A=T＞G）。此外，該酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脫嘌呤/嘧啶（AP）位點(diǎn)特異性核酸內(nèi)切酶活性。

 

產(chǎn)品信息

貨號(hào)	14525ES90 / 14525ES96
規(guī)格	5,000 U / 25,000 U

 

組分信息

組分編號(hào)	組分名稱	14525ES90	14525ES96
14525-A	Exonuclease III (100 U/μL)	50 μL	5×50 μL
14525-B	10× Exo III Buffer	500 μL	5× 500 μL

 

儲(chǔ)存條件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

酶切反應(yīng)操作步驟

1. 于冰上配置如下反應(yīng)體系

組分	使用量
DNA	~ 5 μg
10× Exo III Buffer	5 μL
Exonuclease III (100 U/μL)	0.5 μL
Nuclease-Free Water	to 50 μL

2. 37℃孵育30 min。

3. 加入終濃度為11 mM的EDTA終止反應(yīng)或70℃孵育30 min使Exonuclease III失活。

4. 瓊脂糖電泳檢測(cè)雙鏈DNA酶切結(jié)果。

 

注意事項(xiàng)

1. Exonuclease III 不能切割硫代磷酸酯鍵。因此，也可以通過引入一個(gè) α-硫代磷酸核苷酸將DNA分子的一端保護(hù)起來，以

進(jìn)行單向切割。這種特性可以用于對(duì)一端為鈍化末端（3’突出端），另一端是敏感末端（平端或 5’突出端）的線性DNA分子進(jìn)行單方向切割。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。

Ver.CN20231212