產(chǎn)品描述

2× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace開發(fā)的，針對于高通量測序領(lǐng)域中多重PCR文庫構(gòu)建應(yīng)用專門優(yōu)化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。其蛋白結(jié)構(gòu)包含5’→3’聚合酶結(jié)構(gòu)域和經(jīng)過改造的3’→5’外切酶結(jié)構(gòu)域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了獨特的延伸因子，擴增速度達到15 sec/kb。本產(chǎn)品為2×mix PCR混合液，可添加的模板、引物體積范圍大，使您的實驗更加靈活（本公司另有5×mix可供選擇，Cat.10137）。

產(chǎn)品應(yīng)用

多重PCR文庫構(gòu)建。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

2. 值得注意的是，多重PCR建庫實驗本身具有一定的難度，通常需要進行優(yōu)化，如您在使用本產(chǎn)品時遇到困難，可聯(lián)系我們的技術(shù)支持，我們有多重優(yōu)化方案，可幫助您更好的構(gòu)建實驗體系。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

PCR反應(yīng)體系（推薦冰上配制）

【注】：

1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。

2）引物與模板：第一輪多重PCR進行target enrichment，其中的引物和模板條件需要自行摸索。

第二輪多重PCR引物的濃度建議使用：10 μM引物 加2 μL左右。

第一輪PCR擴增程序：

【注】在PCR儀上設(shè)置上表中的反應(yīng)程序進行多重PCR反應(yīng)（設(shè)置熱蓋溫度至105℃左右）。

退火/延伸時間：100重PCR推薦4 min；1000重推薦8-10 min需要自己根據(jù)引物情況摸索。

PCR產(chǎn)物磁珠純化

建議在50 μL 反應(yīng)體系中加45 μL磁珠（Cat:12601）進行產(chǎn)物純化。

第二輪PCR擴增程序：

【注】：退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為30 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。

PCR產(chǎn)物磁珠純化

建議在50 μL 反應(yīng)體系中加45 μL磁珠（Cat:12601）進行產(chǎn)物純化。

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 HB210831