產(chǎn)品簡介  

螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61 kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的過程中會發(fā)出波長為560 nm左右的生物螢光。

檢測原理如圖所示：

 

 

圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖

翌圣生物Bio-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑盒的特點是操作簡便，且信號強度高。實驗前無需對細胞進行清洗或收集，將試劑直接加入培養(yǎng)基中即可，對細胞的裂解和檢測一步完成，節(jié)省了實驗時間。本試劑盒在信號強度與穩(wěn)定性之間做到了相對平衡。即保持了相對較高的信號強度，又在一定的時間內(nèi)保持信號強度的相對穩(wěn)定。使得實驗結(jié)果準確可靠。半衰期通?？蛇_1h以上。本產(chǎn)品測定樣品的線性范圍寬。96孔板中，可以在20萬個細胞范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

 

產(chǎn)品信息

貨號	11411ES60/11411ES80/11411ES81
規(guī)格	100T/10×100T /1000T

 

組分信息

組分名稱	11411ES60	11411ES80	11411ES81
Bio-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑	10 mL	10×10 mL	100 mL

 

儲存條件

-80ºC避光保存，未開封試劑有效期一年；如果-20ºC避光保存，推薦2個星期以內(nèi)使用。拆封后推薦分裝（避光）。

 

使用說明

1. 實驗準備

1. 主要實驗耗材與設(shè)備：200 μL 移液器或者排槍；不透光白色酶標板或黑色酶標板；多功能酶標儀或者其他能夠檢測生物發(fā)光的儀器。
2. 反應溫度：酶促反應對溫度較為敏感，請將細胞培養(yǎng)板，檢測試劑，酶標儀（可在機器設(shè)定溫度）平衡至室溫（最好20-25℃）時再使用；檢測試劑復溫環(huán)境不能超過25℃。

注：培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，室溫放置20 min以平衡至室溫。檢測試劑解凍后要完全恢復到室溫再使用。

3. 檢測儀器設(shè)置：根據(jù)實驗室所用儀器，設(shè)置對應參數(shù)即可。
4. 檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標板或者黑色酶標板；如測量光度值較高，為避免互相干擾，也可隔孔上樣。
5. 實驗中請穿實驗服并戴一次性手套。

2. 實驗步驟（以96孔板為例）

1. 裂解細胞

1. 貼壁細胞：推薦匯合度在90%以上。不用吸除細胞培養(yǎng)基，通常加入與培養(yǎng)基同體積的混合試劑即可。
2. 懸浮細胞：只要細胞生長良好，一般無密度要求。其他同貼壁細胞。

推薦使用量

細胞培養(yǎng)皿	384孔板	96孔板
培養(yǎng)基體積	25 μL	100 μL
添加試劑體積	25 μL	100 μL

3. 直接加入試劑后用槍頭吹打5次，使細胞裂解更充分。等待5 min，使細胞充分裂解。
4. 用槍頭吹打時盡量不要有泡沫和氣泡出現(xiàn)。

2. 上樣

每孔吸取100 μL混合液（檢測試劑+細胞培養(yǎng)基）到檢測板。

3. 熒光檢測

設(shè)置酶標儀參數(shù)。將檢測板放入酶標儀，震動幾秒，檢測即可。

 

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 溫度影響：溫度直接影響熒光素酶的反應速率。而發(fā)光強度和半衰期取決于熒光素酶的反應速率。所以在加樣前，應將需要將本試劑盒細胞培養(yǎng)板均平衡至室溫，以保證檢測結(jié)果的一致性。如將多孔板堆疊放置，將需要更長時間恢復到室溫。如未充分平衡，可導致中心孔和四周孔之間的梯度效應。

 

FAQ

1) 問：凍融對試劑盒的檢測效果是否有影響？

答：經(jīng)相關(guān)實驗表明-70℃反復凍融5次對發(fā)光值影響極其微小，且穩(wěn)定性基本無變化。但為了獲得相對較好的實驗數(shù)據(jù)，不推薦多次凍融。

 

Ver.CN20240530