性能展示
>>菌落快速、高效擴(kuò)增
圖1. 大腸桿菌菌落極限延伸時(shí)間擴(kuò)增測(cè)試，3 kb以內(nèi)片段10167ES擴(kuò)增的延伸效率可達(dá)1 sec/kb，6 kb片段擴(kuò)增的延伸效率可達(dá)3 sec/kb，6-10 kb片段擴(kuò)增的延伸效率可達(dá)5 sec/kb。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。
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口碑爆款2×Hieff? Ultra-Rapid II HotStart PCR Master Mix
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產(chǎn)品說(shuō)明書
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2×Hieff® Ultra-Rapid II HotStart PCR Master Mix含有經(jīng)過(guò)抗體修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA Polymerase，添加強(qiáng)力延伸因子以及優(yōu)化的緩沖體系，具有超高的擴(kuò)增效率，十分適用于大腸桿菌、農(nóng)桿菌、酵母菌等大多數(shù)菌落PCR擴(kuò)增。本產(chǎn)品3 kb以內(nèi)基因組等復(fù)雜模板擴(kuò)增的延伸速度可達(dá)1 sec/kb，3-6 kb片段擴(kuò)增速度可達(dá)3 sec/kb，6-10 kb片段擴(kuò)增速度可達(dá)5 sec/kb，10 kb以上片段擴(kuò)增速度可達(dá)10 sec/kb；6 kb以內(nèi)質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板擴(kuò)增速度可達(dá)1 sec/kb，可大幅節(jié)省PCR反應(yīng)時(shí)間。同時(shí)，Mix中含有dNTPs、Mg2+，使用時(shí)只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增。此外，Mix中含有紅色示蹤染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行電泳，使用方便。體系中加入的保護(hù)劑使得本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可輕松克隆至T載體。
產(chǎn)品用途
快速PCR；菌落PCR；基因型鑒定。
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
圖2. 10167ES擴(kuò)增1-10 kb農(nóng)桿菌菌落，檢出率100%，產(chǎn)量高，性能優(yōu)于競(jìng)品。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。10167ES擴(kuò)增速度10 sec/kb，競(jìng)品擴(kuò)增15 sec/kb。
>>長(zhǎng)片段+高GC菌液快速、高效擴(kuò)增
圖3. 長(zhǎng)片段+高GC菌液擴(kuò)增，結(jié)果顯示10167ES擴(kuò)增產(chǎn)量高，檢出率100%，性能優(yōu)于競(jìng)品。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。10167ES擴(kuò)增速度10 sec/kb，競(jìng)品擴(kuò)增15 sec/kb。
>>基因組DNA快速、高效擴(kuò)增
圖4. 10167ES擴(kuò)增1-10 kb小鼠gDNA，擴(kuò)增產(chǎn)量高，檢出率100%，性能優(yōu)于競(jìng)品。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。10167ES擴(kuò)增速度10 sec/kb，競(jìng)品擴(kuò)增15 sec/kb。
>>λDNA快速、高效擴(kuò)增
圖5. 10167ES擴(kuò)增5-15 kb λDNA，5-10 kb以內(nèi)片段擴(kuò)增的延伸效率可達(dá)1 sec/kb，15 kb片段擴(kuò)增的延伸效率可達(dá)3 sec/kb。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。
>>低至高GC基因組模板快速、高效擴(kuò)增
圖6. 不同模板GC含量測(cè)試，結(jié)果顯示10167ES擴(kuò)增產(chǎn)量高，檢出率100%，性能優(yōu)于競(jìng)品。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。10167ES擴(kuò)增速度10 sec/kb，競(jìng)品擴(kuò)增15 sec/kb。
>>試劑穩(wěn)定性好，反復(fù)凍融拿取無(wú)憂
圖7. 10167ES凍融100次后依舊穩(wěn)定擴(kuò)增5 kb λDNA和5 kb人gDNA。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。
圖8. 10167ES在37℃條件下加熱14天后，依舊穩(wěn)定擴(kuò)增大腸桿菌、農(nóng)桿菌和酵母菌落。M：10,000 DNA Marker（10505ES）。
使用說(shuō)明
- 推薦PCR反應(yīng)體系
|
組分 |
體積（μL） |
體積（μL） |
終濃度 |
|
2×Hieff® Ultra-Rapid II HotStart PCR Master Mix* |
25 |
12.5 |
1× |
|
模板** |
x |
x |
- |
|
正向引物F（10 μM）*** |
2 |
1 |
0.4-0.5 μM |
|
反向引物R（10 μM） |
2 |
1 |
0.4-0.5 μM |
|
ddH2O |
Up to 50 |
Up to 25 |
- |
表1 PCR反應(yīng)體系
*在1×預(yù)混液中含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs，使用前要充分解凍混勻。
**大腸桿菌及農(nóng)桿菌可直接吸取菌液或挑菌上樣；酵母菌菌液及菌株建議煮沸5 min后放入-80℃冰箱3 min，待解凍后上樣；注意菌液樣本需震蕩混勻后再上樣，其中菌液推薦上樣量為2-4 μL（0.5-0.8 OD600）。
不同模板的推薦使用量：
|
模板種類 |
使用量范圍（25 μL反應(yīng)體系） |
|
基因組DNA |
10–1,000 ng |
|
質(zhì)?；?/font>λDNA |
0.5-50 ng |
|
大腸桿菌菌液 |
0.5-0.8 OD600 |
表2 不同模板的推薦使用量
***PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.4 μM。
- 反應(yīng)程序
|
循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
95℃ |
15 sec |
30-35 |
|
退火* |
60℃ |
20 sec |
|
|
延伸** |
72℃ |
1-10 sec/kb |
|
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
表3 PCR反應(yīng)程序
*推薦退火溫度：60°C，也可根據(jù)自身需要設(shè)立溫度梯度摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
**延伸速度：3 kb以內(nèi)的基因組、大腸桿菌等復(fù)雜模板可設(shè)置1 sec/kb，6 kb以內(nèi)復(fù)雜模板可設(shè)置3 sec/kb，10 kb以內(nèi)大部分復(fù)雜模板可設(shè)置5 sec/kb擴(kuò)增，10 kb以上復(fù)雜模板片段可設(shè)置10 sec/kb。6 kb以內(nèi)的質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板可設(shè)置1 sec/kb，6-10 kb質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板可設(shè)置3 sec/kb，10 kb以上質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板可設(shè)置5-10 sec/kb。如需提高產(chǎn)量可適當(dāng)延長(zhǎng)延伸時(shí)間，不宜超過(guò)30 sec/kb。
注意事項(xiàng)
- 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途！
Ver.CN20240507
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