熱敏UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA鏈的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。熱敏UDG酶與普通UDG酶相比，避免了常規(guī)UDG酶滅活后可能存在的殘留活性在常溫下對含dU擴增產(chǎn)物的降解作用。本產(chǎn)品在室溫下起作用，且對溫度敏感、易于滅活。

 

產(chǎn)品組分

編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		10303ES60 (100 U)	10303ES76 (500 U)	10303ES96 (10,000 U)	10303ES97 (100 mL)	10303ES98 (500 mL)
10303	Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	100 μL	500 μL	10 mL	100 mL	500 mL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1. 去除含dU的PCR產(chǎn)物氣溶膠污染。

2. 去除單鏈或雙鏈DNA尿嘧啶堿基。

 

酶活定義

以25℃，30 min內(nèi)完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定義為1個活性單位（U）。

 

失活方式

50℃，10 min。

 

運輸儲存方法

干冰運輸。-20℃保存，有效期2年。

 

注意事項

1. 熱敏UDG在多數(shù)PCR反應(yīng)緩沖液中均有活性；

2. 酶使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；

3. 本產(chǎn)品僅做科研用途；

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

應(yīng)用實例

1. 按下列體系配制PCR反應(yīng)液：

組分	體積（μL）	終濃度
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus)	5	1×
25 mM MgCl2	3	1.5 mM
dUTP (10 mM)	3	0.6 mM
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each)	1	0.2 mM each
模板DNA	Optional	-
引物1 (10 μM)	2	0.4 μM
引物2 (10 μM)	2	0.4 μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5	0.05 U/μL
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	1	1 U/50 μL
ddH2O	Up to 50

【注】：根據(jù)實驗需要，dUTP終濃度可在0.2-0.6 mM 之間調(diào)整?？蛇x擇性摻入0.2 mM dTTP。

2. PCR反應(yīng)：

反應(yīng)溫度	反應(yīng)時間	循環(huán)數(shù)	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板預(yù)變性
95℃	10 sec	30-35	變性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	終延伸

【注】：25℃反應(yīng)時間可以根據(jù)實驗需要在5-10 min內(nèi)調(diào)整。

 

HB220930