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Hieff NGS^? 96 Single Index Primer Kit for Illumina?,Set 2(48種)

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FAQ

COA

已發(fā)表文獻(xiàn)

產(chǎn)品描述

_{Hieff NGS}^®_{96 Single I}_{ndex Primer Kit for Illumina}^®_{, Set 2（48種）是Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)文庫構(gòu)建專用試劑盒，共分為2個(gè)Set，每個(gè)Set包含48種Index Primer。本試劑盒提供了二代測(cè)序建庫中使用的adapter和單端96種Index Primer，適用于Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)多樣品DNA文庫構(gòu)建。試劑盒中提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。}

產(chǎn)品組分

_編號(hào)	_名稱	_規(guī)格
_12611ES02	_PE Adapter	_336 μL
	_{Universal Primer}	_240 μL
	_{Index Primer 1-48}	_5 μL each
_12612ES02	_PE Adapter	_336 μL
	_{Universal Primer}	_240 μL
	_{Index Primer 49-96}	_5 μL each

運(yùn)輸與保存方法

_{冰袋運(yùn)輸。}

_{所有組分-20°C保存，有效期18個(gè)月。}

注意事項(xiàng)

_{1. 本試劑盒中DNA Adapter的濃度為15 μM，單個(gè)文庫構(gòu)建的接頭使用量根據(jù)所用試劑盒進(jìn)行調(diào)整。}

_{2. 本試劑盒提供的DNA Adapter為通用型短接頭，需要通過PCR擴(kuò)增獲得完整的文庫。Index Primer提供Barcode序列標(biāo)簽，用于高通量測(cè)序時(shí)區(qū)分樣品。}

_{3. 本試劑盒每個(gè)Set包含48種Index Primer，每種Index Primer可以構(gòu)建2個(gè)DNA文庫，每個(gè)Set可以構(gòu)建96個(gè)DNA文庫。}

_{4. 切勿加熱接頭，應(yīng)在室溫讓其緩慢溶解，實(shí)驗(yàn)室溫度最好設(shè)置為20-25℃。接頭避免反復(fù)凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4℃。}

_{5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®試劑盒構(gòu)建的DNA文庫結(jié)構(gòu)如下：}

_{6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

7. 本產(chǎn)品僅作科研用途！}

使用方法

_{本試劑盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 試劑盒操作說明進(jìn)行。}

_{接頭連接（Adapter Ligation）：}

_{在末端修復(fù)產(chǎn)物兩端連接特定的Illumina®接頭，即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步驟3.2。}

_{1. 根據(jù)Input DNA量按照下表1選擇合適的Adapter用量；}

_{表1. 不同Input DNA推薦的Adapter使用濃度}

_{Input DNA}	_{Adapter : Input DNA摩爾比}	_{推薦Adapter(15 μM)使用量}
_400 ng	_30:1	_3.5 μL
_{300 ng}	_40:1	_3.5 μL
_200 ng	_60:1	_3.5 μL
_{100 ng}	_100:1	_3.0 μL
_{50 ng}	_100:1	_1.5 μL

_{【注】：Input DNA 摩爾數(shù)（pmol）≈Input DNA質(zhì)量(ng)/[0.66×Input DNA平均長度（bp）]}

_{2. 將表2中的各種試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；}

_{3. 配制表2所示反應(yīng)體系；}

_{表2. Adapter Ligation反應(yīng)體系}

_名稱	_{體積（μL）}
_{dA-tailed DNA}	₆₀
_{Ligation Enhancer}	_30*
_{Quick T4 DNA Ligase}	₅
_PE Adapter	_x**
_ddH2O	_5-x

_{【注】：*Ligation Enhancer比較粘稠，請(qǐng)上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時(shí)后離心使用。}

_{**本公司接頭濃度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）與常規(guī)商業(yè)化試劑盒一致，皆為15 μmol/L。請(qǐng)根據(jù)注意事項(xiàng)三中的提示，計(jì)算接頭用量。}

_{4. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；}

_{5. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表3所示反應(yīng)程序，進(jìn)行接頭連接反應(yīng)：}

_{表3. Adapter Ligation反應(yīng)程序}

_溫度	_時(shí)間
_熱蓋	_Off
_20°C	_15 min
_4°C	_Hold

_{【注】：當(dāng)Input DNA量較低，實(shí)驗(yàn)效果不理想時(shí)，可嘗試將連接時(shí)間延長一倍。}

_{連接產(chǎn)物磁珠純化（Post Ligation Clean Up）}

_{該步驟使用磁珠對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行純化或分選。純化可除去未連接的Adapter或Adapter Dimer等無效產(chǎn)物，分選可篩選特定長度DNA片段以符合測(cè)序需要，詳細(xì)操作步驟參照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建庫試劑盒說明書。}

_{文庫擴(kuò)增（Library Amplification）}

_{該步驟將對(duì)純化或長度分選后的接頭連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增富集，使用本試劑盒接頭時(shí)，該步驟為必做步驟；}

_{1. 將表4中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；}

_{2. 于無菌PCR管中配制表4所示反應(yīng)體系；}

_{表4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系}

_名稱	_{體積（μL）}
_{2× Super Canace®ⅡHigh-Fidelity Mix}	₂₅
_{Universal Primer}	_2.5
_{Index Primer}	_2.5
_{Adapter Ligated DNA}	₂₀

_{【注】：文庫擴(kuò)增引物來自Yeasen接頭引物試劑盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。}

_{3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液收集至管底；}

_{4. 將PCR管置于PCR儀中，設(shè)置表5所示反應(yīng)程序，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。}

_{表5. PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序}

_溫度	_時(shí)間	_{循環(huán)數(shù)}
_98°C	_{1 min}	₁
_98°C	_{10 sec}	_{根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整}
_60°C	_{30 sec}
_72°C	_{30 sec}
_72°C	_{5 min}	₁
_4°C	_Hold	_-

_序列信息

_{PE Adapter for Illumina：

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTC -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3´}

_{Universal Primer for Illumina：

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´}

_{Index Primer for Illumina：}

_{5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´}

_{xxxxxxxx表示8 bp 的Index序列，各引物對(duì)應(yīng)的Index名稱、引物中包含的Index序列以及測(cè)序時(shí)對(duì)應(yīng)的Index序列信息如下表所示：}

_{Index Primer名稱}	_{引物中Index序列}	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}	_{Index Primer名稱}	_{引物中Index序列}	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}
_{Index Primer 1}	_ATCACGTT	_AACGTGAT	_{Index Primer 25}	_TGCGATCT	_AGATCGCA
_{Index Primer 2}	_CGATGTTT	_AAACATCG	_{Index Primer 26}	_TTCCTGCT	_AGCAGGAA
_{Index Primer 3}	_TTAGGCAT	_ATGCCTAA	_{Index Primer 27}	_TAGTGACT	_AGTCACTA
_{Index Primer 4}	_TGACCACT	_AGTGGTCA	_{Index Primer 28}	_TACAGGAT	_ATCCTGTA
_{Index Primer 5}	_ACAGTGGT	_ACCACTGT	_{Index Primer 29}	_TCCTCAAT	_ATTGAGGA
_{Index Primer 6}	_GCCAATGT	_ACATTGGC	_{Index Primer 30}	_TGTGGTTG	_CAACCACA
_{Index Primer 7}	_CAGATCTG	_CAGATCTG	_{Index Primer 31}	_TACTAGTC	_GACTAGTA
_{Index Primer 8}	_ACTTGATG	_CATCAAGT	_{Index Primer 32}	_TTCCATTG	_CAATGGAA
_{Index Primer 9}	_GATCAGCG	_CGCTGATC	_{Index Primer 33}	_TCGAAGTG	_CACTTCGA
_{Index Primer 10}	_TAGCTTGT	_ACAAGCTA	_{Index Primer 34}	_TAACGCTG	_CAGCGTTA
_{Index Primer 11}	_GGCTACAG	_CTGTAGCC	_{Index Primer 35}	_TTGGTATG	_CATACCAA
_{Index Primer 12}	_CTTGTACT	_AGTACAAG	_{Index Primer 36}	_TGAACTGG	_CCAGTTCA
_{Index Primer 13}	_TGGTTGTT	_AACAACCA	_{Index Primer 37}	_TACTTCGG	_CCGAAGTA
_{Index Primer 14}	_TCTCGGTT	_AACCGAGA	_{Index Primer 38}	_TCTCACGG	_CCGTGAGA

_{Index Primer名稱}	_引物中 _Index序列	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}	_{Index Primer名稱}	_{引物中Index序列}	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}
_{Index Primer 15}	_TAAGCGTT	_AACGCTTA	_{Index Primer 39}	_TCAGGAGG	_CCTCCTGA
_{Index Primer 16}	_TCCGTCTT	_AAGACGGA	_{Index Primer 40}	_TAAGTTCG	_CGAACTTA
_{Index Primer 17}	_TGTACCTT	_AAGGTACA	_{Index Primer 41}	_TCCAGTCG	_CGACTGGA
_{Index Primer 18}	_TTCTGTGT	_ACACAGAA	_{Index Primer 42}	_TGTATGCG	_CGCATACA
_{Index Primer 19}	_TCTGCTGT	_ACAGCAGA	_{Index Primer 43}	_TCATTGAG	_CTCAATGA
_{Index Primer 20}	_TTGGAGGT	_ACCTCCAA	_{Index Primer 44}	_TGGCTCAG	_CTGAGCCA
_{Index Primer 21}	_TCGAGCGT	_ACGCTCGA	_{Index Primer 45}	_TATGCCAG	_CTGGCATA
_{Index Primer 22}	_TGATACGT	_ACGTATCA	_{Index Primer 46}	_TCAGATTC	_GAATCTGA
_{Index Primer 23}	_TGCATAGT	_ACTATGCA	_{Index Primer 47}	_TAGTCTTG	_CAAGACTA
_{Index Primer 24}	_TTGACTCT	_AGAGTCAA	_{Index Primer 48}	_TTCAGCTC	_GAGCTGAA

_{Index Primer名稱}	_引物中 _Index序列	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}	_{Index Primer名稱}	_{引物中Index序列}	_{測(cè)序?qū)?yīng)Index序列}
_{Index Primer 49}	_TGTCTATC	_GATAGACA	_{Index Primer 73}	_GCAACATT	_AATGTTGC
_{Index Primer 50}	_TATGTGGC	_GCCACATA	_{Index Primer 74}	_GGTCGTGT	_ACACGACC
_{Index Primer 51}	_TTACTCGC	_GCGAGTAA	_{Index Primer 75}	_GAATCTGT	_ACAGATTC
_{Index Primer 52}	_TCGTTAGC	_GCTAACGA	_{Index Primer 76}	_GTACATCT	_AGATGTAC
_{Index Primer 53}	_TACCGAGC	_GCTCGGTA	_{Index Primer 77}	_GAGGTGCT	_AGCACCTC
_{Index Primer 54}	_TGTTCTCC	_GGAGAACA	_{Index Primer 78}	_GCATGGCT	_AGCCATGC
_{Index Primer 55}	_TTCGCACC	_GGTGCGAA	_{Index Primer 79}	_GTTAGCCT	_AGGCTAAC
_{Index Primer 56}	_TTGCGTAC	_GTACGCAA	_{Index Primer 80}	_GTCGCTAT	_ATAGCGAC
_{Index Primer 57}	_TCTACGAC	_GTCGTAGA	_{Index Primer 81}	_GGAATGAT	_ATCATTCC
_{Index Primer 58}	_TGACAGAC	_GTCTGTCA	_{Index Primer 82}	_GAGCCAAT	_ATTGGCTC
_{Index Primer 59}	_TAGAACAC	_GTGTTCTA	_{Index Primer 83}	_GCTCCTTG	_CAAGGAGC
_{Index Primer 60}	_TCATCCTA	_TAGGATGA	_{Index Primer 84}	_GTAAGGTG	_CACCTTAC
_{Index Primer 61}	_TGCTGATA	_TATCAGCA	_{Index Primer 85}	_GAGGATGG	_CCATCCTC
_{Index Primer 62}	_TAGACGGA	_TCCGTCTA	_{Index Primer 86}	_GTTGTCGG	_CCGACAAC
_{Index Primer 63}	_TGTGAAGA	_TCTTCACA	_{Index Primer 87}	_GGATTAGG	_CCTAATCC
_{Index Primer 64}	_TCTCTTCA	_TGAAGAGA	_{Index Primer 88}	_GATAGAGG	_CCTCTATC
_{Index Primer 65}	_TTGTTCCA	_TGGAACAA	_{Index Primer 89}	_GTGTGTCG	_CGACACAC
_{Index Primer 66}	_TGAAGCCA	_TGGCTTCA	_{Index Primer 90}	_GCAATCCG	_CGGATTGC
_{Index Primer 67}	_TACCACCA	_TGGTGGTA	_{Index Primer 91}	_GACCTTAG	_CTAAGGTC
_{Index Primer 68}	_TGCGTGAA	_TTCACGCA	_{Index Primer 92}	_GCCTGTTC	_GAACAGGC
_{Index Primer 69}	_GGTGAGTT	_AACTCACC	_{Index Primer 93}	_GCACTGTC	_GACAGTGC
_{Index Primer 70}	_GATCTCTT	_AAGAGATC	_{Index Primer 94}	_GCTAACTC	_GAGTTAGC
_{Index Primer 71}	_GTGTCCTT	_AAGGACAC	_{Index Primer 95}	_GATTCATC	_GATGAATC
_{Index Primer 72}	_GACGGATT	_AATCCGTC	_{Index Primer 96}	_GTCTTGGC	_GCCAAGAC

相關(guān)產(chǎn)品

_接頭類型		_貨號(hào)	_名稱	_規(guī)格	_{價(jià)格（元）}
_短接頭	_單端 _{96 Index}	_12611ES02	_{Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1（48種）}	_{48×2 T}	₁₄₉₃
	_單端 _{96 Index}	_12612ES02	_{Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 2（48種）}	_{48×2 T}	₁₄₉₃
	_雙端 _{384 Index}	_12613ES02	_{Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ，Set 1（96 種）}	_{96×2 T}	₂₇₅₃
	_雙端 _{384 Index}	_12614ES02	_{Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ，Set 2（96 種）}	_{96×2 T}	₂₇₅₃
_完整接頭		_12615ES04/16	_{Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1}	_12×4/ _{12×16 T}	_1256/4526
		_12616ES04/16	_{Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2}	_12×4/ _{12×16 T}	_1256/4536
		_12617ES04/16	_{Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3}	_12×4/ _{12×16 T}	_1256/4536
		_12618ES04/16	_{Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4}	_12×4/ _{12×16 T}	_1256/4536
_Tn5接頭		_12610ES96	_{Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index)}	_{96 T}	₁₃₆₅

_HB190103

400-6111-883