隨著醫(yī)療行業(yè)的蓬勃發(fā)展，類器官/干細(xì)胞培養(yǎng)的熱度不斷攀升，胃類器官也是類器官培養(yǎng)中比較受關(guān)注的一類。體外培養(yǎng)的胃類器官含有多種細(xì)胞克隆亞群，常衍生于胃干細(xì)胞或者多能誘導(dǎo)干細(xì)胞，其培養(yǎng)環(huán)境模擬體內(nèi)的微環(huán)境，因此胃類器官在細(xì)胞組分、空間結(jié)構(gòu)和生物功能等方面與胃上皮組織高度類似，為人類胃的生理與疾病的研究提供了一個(gè)有利的平臺(tái)和工具。

胃類器官的培養(yǎng)較為繁瑣，胃上皮腺體可分為胃底腺和胃竇腺兩部分，均可用來(lái)構(gòu)建胃上皮類器官。胃上皮類器官培養(yǎng)的原理就是3D條件下培養(yǎng)胃上皮干細(xì)胞，需要加入小分子化合物（如Gsatrin、Y-27632）和生長(zhǎng)因子來(lái)刺激干細(xì)胞分裂、分化并形成球囊狀結(jié)構(gòu)。Gastrin I 則是胃類器官培養(yǎng)基中必須添加的小分子化合物，常用工作濃度為1-10 nM。下面總結(jié)了胃類器官培養(yǎng)的大致過(guò)程以及所需要的各種化合物、生化試劑和耗材等。

胃類器官培養(yǎng)所需的化合物、生化試劑、細(xì)胞因子、耗材等：

一. 胃類器官的復(fù)蘇

1. 將儲(chǔ)存有類器官的凍存管置于37度水浴中2-3分鐘，讓其快速解凍。 

2. 將凍存管內(nèi)的類器官轉(zhuǎn)移至錐形管中，并加入適量胃類器官培養(yǎng)基。用血清移液管吹打2-3次，重懸類器官。

3. 500g離心3分鐘，沉淀胃類器官，并棄去上清液。

4. 用低生長(zhǎng)因子提取物重懸胃類器官，用血清移液管吹打2-3次，充分吹散均勻后加入到24孔板中，加入適量的重懸液。

5. 將24孔板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，孵育約30分鐘。

6. 制備胃類器官傳代培養(yǎng)基。

制備培養(yǎng)基所需的化合物：

7. 在每孔中加入適量胃類器官傳代培養(yǎng)基。

8. 將含有胃類器官的培養(yǎng)板放到細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。

二. 胃類器官的培養(yǎng)

每2-3天對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行更新，棄去廢液，更換新鮮培養(yǎng)基，持續(xù)1-2周后，可進(jìn)行傳代。

三. 胃類器官的傳代

1. 在顯微鏡下觀察胃類器官的生長(zhǎng)情況，24孔板中每孔可含有500-1000個(gè)類器官。

2. 將含有胃類器官的24孔板從細(xì)胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移至錐形瓶中。

3. 500g離心3分鐘，沉淀胃類器官。從管的底部吸取培養(yǎng)基消化提取。

4. 用血清移液管輕輕吹打2-3次，將錐形瓶放入37度水浴中，孵育10-15分鐘，消化提取物。

5. 錐形瓶中加入適量的FBS，終止消化。

6. 用血清移液管輕輕吹打2-3次后，對(duì)類器官進(jìn)行過(guò)濾，分離。

7. 500g離心3分鐘，沉淀胃類器官，棄上清。

8. 用培養(yǎng)基重懸類器官，并加入24孔板中，將培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，孵育25-30分鐘。

9. 在24孔板中加入適量的傳代培養(yǎng)基，并置于細(xì)胞培養(yǎng)中繼續(xù)培養(yǎng)。

圖：多能干細(xì)胞分離的胚層成分可用于組織工程以生成復(fù)雜的人體胃類器官^[1]

[1] Eicher A K ,  Kechele D O ,  Sundaram N , et al. Functional human gastrointestinal organoids can be engineered from three primary germ layers derived separately from pluripotent stem cells - ScienceDirect.  2021.