各位小伙伴，您是否在蛋白免疫印記時(shí)，面對(duì)各種內(nèi)參抗體而不知所措呢，內(nèi)參蛋白是生物體內(nèi)管家基因編碼的，在多組織中穩(wěn)定表達(dá)，用于驗(yàn)證免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中是否正常進(jìn)行和一種半定量檢測(cè)蛋白表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，那么如何正確的選擇內(nèi)參抗體呢！可以從以下幾點(diǎn)去參考。
 

一、樣本種屬來源
 

1. 哺乳動(dòng)物組織或著細(xì)胞來源的樣本，一般選擇β-actin、α-tubulin、GAPDH、Lamin- B、Histone H3、Na+/K+-ATPase。

2. 植物來源樣本，一般選擇plant actin、Rubisco等。

3.其他研究較稀少的樣本，通過查詢相關(guān)文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

 

二、目的蛋白分子量
 

保證目的蛋白分子量與內(nèi)參相差大于5KDa以上，防止檢測(cè)時(shí)干擾，例如，目的蛋白為40KDa，不宜選擇β-actin（42KDa）作內(nèi)參，可考慮GAPDH (36KDa) 或者β-tubulin(55KDa)作為內(nèi)參。
 

三、內(nèi)參蛋白表達(dá)部位

 

因此，提取蛋白的部位不同，選擇的內(nèi)參蛋白也不同。比如有時(shí)胞質(zhì)、胞核分開提取而不提取總蛋白時(shí)，就要選擇相應(yīng)部位表達(dá)的內(nèi)參蛋白。如 H3在細(xì)胞核中高效穩(wěn)定表達(dá)，理論上在細(xì)胞質(zhì)不表達(dá)，那么對(duì)于胞質(zhì)提取的蛋白，就不能選用H3作為內(nèi)參蛋白，而應(yīng)該選擇細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)的β-actin 、GAPDH α-Tubulin等作為內(nèi)參蛋白。（內(nèi)參評(píng)價(jià)推薦軟件geNorm、NormFinder）

 

注意：使用內(nèi)參抗體需避開以下情況

亞細(xì)胞定位	內(nèi)參	分子量KDa	注意事項(xiàng)
胞漿、全細(xì)胞	β-actin	42	不適用于細(xì)胞核提取物，因?yàn)?beta;-actin是染色質(zhì)重塑復(fù)合物中的組分;可能不適合于研究對(duì)象之間年齡差異大的情況
	α-Tubulin	55	可能不適合于研究對(duì)象之間年齡差異大的情況，微管蛋白的表達(dá)隨著抗菌和抗有絲分裂抗性藥物而改變，因此在加入抗癌和抗真菌藥物時(shí)
	β-Tubulin	55
	GAPDH	36	組織細(xì)胞缺氧會(huì)引起GAPDH表達(dá)上調(diào)，因此不適用于與氧有關(guān)的研究，糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致 GAPDH的表達(dá)量增高
	Vinculin	117	大分子量蛋白可參考
線粒體	COXIV 系列	15-17	該系列蛋白主要集中于15-17KDa,如果目標(biāo)蛋白分子量接近，可考慮其他內(nèi)參
	HSP60	60
細(xì)胞核	VDAC1/2	31-37	該系列蛋白主要集中于31-37KDa
	Lamin B1	66	不是適用于胚胎干細(xì)胞，凋亡實(shí)驗(yàn)中不適合做內(nèi)參
	PCNA	36	非增值細(xì)胞不適用
	TBP	33-43	TBP在人類中是37-43KDa,在小鼠和大鼠中是33-36KDa，不適合凋亡實(shí)驗(yàn)
	YY1	65-70
	Histone H3	17	多數(shù)蛋白分子量在17KDa左右，如果目標(biāo)蛋白分子量接近，可考慮其他內(nèi)參
全血、血清、血漿	Transferrin	77	表達(dá)狀況受某些疾病狀態(tài)和治療的影響，比如視黃酸
	Albumin	66	含量極高，注意降低WB實(shí)驗(yàn)上樣

 

 

相關(guān)產(chǎn)品

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

內(nèi)參抗體
亞細(xì)胞定位	產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	反應(yīng)種屬	應(yīng)用
胞漿、全細(xì)胞	30201ES	GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 單克隆抗體	Human,Monkey,Rat,Mouse等	WB
	30202ES	GAPDH, Rabbit pAb 兔抗GAPDH多克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	WB,IHC-P,ICC/IF,IP,FC
	30203ES	HRP-conjugated GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 單克隆抗體，HRP標(biāo)記	Human,Mouse,Rat	WB，ELISA
	30101ES	β-actin, Mouse mAb 小鼠抗β-actin單克隆抗體	Human,Mouse,Monkey等	WB
	30102ES	β-actin, Rabbit pAb 兔抗β-actin多克隆抗體	Human,Mouse,Rat	WB,IHC-P,ICC/IF
	30103ES	HRP-conjugated β-actin, Mouse mAb 小鼠抗β-actin單克隆抗體，HRP標(biāo)記	Human,Mouse,Monkey等	WB
	30304ES	α-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗α-Tubulin單克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	IF，WB，IHC，IP
	30301ES	β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin單克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	WB, IHC-F/IHC-P, IF/ICC, ELISA
	30302ES	β-Tubulin, Rabbit pAb 兔抗β-Tubulin多克隆抗體	Human,Mouse,Rat	WB, IHC-P, ICC/IF, FC
	30303ES	HRP-conjugated β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin單克隆抗體，HRP標(biāo)記	Human,Mouse,Rat	WB
	31277ES	Vinculin Rabbit mAb Vinculin兔單克隆抗體	Human,Mouse,Rat	WB, IHC-P
線粒體	30006ES	COXIV Mouse mAb 鼠單克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	WB,IHC,FC,IP
	31485ES	Hsp60 Rabbit mAb	Human, Mouse,Rat	WB, IHC-P
細(xì)胞核	30000ES	VDAC1 Rabbit pAb VDAC1兔多克隆抗體	Human,Mouse,Rabbit	WB, IHC
	30003ES	Lamin B1 Mouse mAb Lamin B1小鼠單克隆抗體	Human,Mouse, Rat	WB IP IF IHC
	30002ES	PCNA Mouse mAb PCNA小鼠單克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	WB IHC ICC IP
	30005ES	Histone-H3 Mouse mAb Histone-H3鼠單克隆抗體	Human,Mouse,Rat等	WB IHC ICC IP
全血、血清、血漿	30001ES	Transferrin Mouse mAb 轉(zhuǎn)鐵蛋白小鼠單克隆抗體	Human	WB IHC ELISA
	31273ES	Human Serum Albumin Mouse mAb	Human	WB ELISA

 

文獻(xiàn)引用：

[1]Zheng G, Jiang C, Li Y, et al. TMEM43-S358L mutation enhances NF-κB-TGFβ signal cascade in arrhythmogenic right ventricular dysplasia/cardiomyopathy[J]. Protein & cell, 2018: 1-16.

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[2] Wang T, Wang J, Wang J, et al. HAP1 is an in vivo UBE3A target that augments autophagy in a mouse model of Angelman syndrome[J]. Neurobiology of disease, 2019, 132: 104585.    30101   IF 5.36

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GAPDH    IF: 5.753

[4] Tan K S, Zhang Y, Liu L, et al. Molecular cloning and characterization of an atypical  butyrylcholinesterase-like protein in zebrafish[J]. Comparative Biochemistry and Physiology  Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2021: 110590.   Flag-Tag (DYKDDDDK), mouse  30503ES20

[5] Zhuang W, Yan Z. The S2–S3 Loop of Kv7. 4 Channels Is Essential for Calmodulin Regulation of  Channel Activation[J]. Frontiers in Physiology, 2020, 11.   30601ES20
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[7] S Chen, et al. Novel Role for Tranilast in Regulating NLRP 3 Ubiquitination, Vascular  Inflammation, and Atherosclerosis JAHA. June 16, 2020 Vol 9, Issue 12 αTUBULIN

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