近幾年，分子診斷快速興起，促進了國內(nèi)檢驗技術(shù)的發(fā)展。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于疾病檢測、基因檢測、病毒和病原菌檢測、食品安全檢測、遺傳檢測、動物檢測，環(huán)境檢測等各個領(lǐng)域。

 

眾所周知，傳統(tǒng)分子診斷試劑存在運輸和保存的難題。為確保試劑內(nèi)有效成分（DNA酶、反轉(zhuǎn)錄酶等）的生物活性，一般需要在-20℃左右的冷鏈環(huán)境中儲運。冷鏈運輸?shù)男枰罅康谋蚋杀?，成本較高，而且環(huán)境溫度的變化容易造成檢測試劑反復(fù)凍融，會直接影響試劑的性能和保質(zhì)期。

 

 

那么，是否有更方便安全的

存儲和運輸?shù)姆绞侥兀?/span>

經(jīng)深入研究，發(fā)現(xiàn)將液體試劑

凍干成固體試劑將能很好解決上述問題

 

凍干試劑優(yōu)勢

 

可常溫運輸和儲存，更長的保質(zhì)期

 

隨來隨測，不同品種同時上機，不同品類同時檢測

 

提高效率，控制成本：常溫、長期穩(wěn)定；快速配送、便捷使用

凍干試劑研發(fā)風(fēng)險

 

絕大部分的溶液都可以開發(fā)成凍干劑型，但是存在一定的風(fēng)險，原料及保護劑、凍干工藝、凍干設(shè)備性能深度跨越、相互干擾，這種領(lǐng)域交叉相互干擾會導(dǎo)致研發(fā)周期失控。由此可見，凍干絕不是簡單的工藝，每一步都需要慎重選擇。

縮短研發(fā)周期的關(guān)鍵因素

 

原料廠家的酶和體系，凍干難度有差異，更加重要的是，能否提供足夠的技術(shù)支持

 

在開發(fā)過程需判斷：體系干擾、輔料及保護劑影響、工藝和環(huán)境干擾

 

翌圣生物提供優(yōu)質(zhì)可凍干原料

——讓核酸檢測更加高效、便捷、經(jīng)濟

 

凍干原料的篩選不是單純?nèi)サ舨豢蓛龈晌镔|(zhì)，原料選擇環(huán)節(jié)需要針對每一個組份進行篩選或調(diào)試。切忌盲目尋找可凍干原料；不同原料，凍干工藝及凍干體系都需要相應(yīng)調(diào)整。

 

翌圣生物在此技術(shù)上不斷加大投入，力求推出優(yōu)質(zhì)可凍干原料，幫助客戶從原料上解決凍干難題。

 

圖. qPCR反應(yīng)體系的組成示意圖

 

可凍干原料酶的篩選

 可凍干酶選擇誤區(qū)

 

液體體系中篩選出性能最優(yōu)的無甘油酶，用于凍干一定沒有問題

 

把已有體系中不可凍干的成分去掉就是可凍干體系了

 

凍干過程能夠?qū)⒉豢蓛龈傻捏w系變?yōu)榭蓛龈审w系

 可凍干酶篩選需注意

 

液體體系中篩選出的性能最優(yōu)的酶，不一定凍干后性能還是最優(yōu)，需要多幾款候選酶

 

酶的氨基酸序列和修飾差異，會影響酶的空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和凍干耐受性

 

酶的儲液直接影響酶的穩(wěn)定性，可凍干酶需要優(yōu)化儲液以保證酶儲存穩(wěn)定

 

甘油酶去除甘油之后，穩(wěn)定性、酶活都可能發(fā)生極大變化，對應(yīng)體系需要重調(diào)

可凍干反應(yīng)體系的調(diào)整

 

Buffer中不可含有可揮發(fā)和易氧化成分

 

需對鹽離子濃度進行調(diào)試-過高可能造成凍干形態(tài)差；過低可能影響擴增性能

 

凍干可能造成pH值變化，影響擴增性能

 

高乘數(shù)的試劑利于凍干

 

凍干原料體系中的保護劑含量需明確

 

凍干對酶有一定損傷，補酶量需調(diào)試

 

Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl₂)（CAT#13775）

 

一種無甘油、即用型的分子診斷試劑，含有耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、反應(yīng)緩沖液、dNTPs、氯化鎂以及凍干保護劑，同時添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴增效率的因子。該產(chǎn)品是開發(fā)常溫穩(wěn)定、可室溫運輸儲存、多重RT-qPCR的理想選擇。

 

來源：翌圣生物

 

 

三大優(yōu)勢值得信賴

 

凍干后依然保持酶活性完整，性能和液體試劑一樣

 

凍干后室溫下保存依然穩(wěn)定，不需要冷鏈運輸和低溫儲存

 

降低成本和操作復(fù)雜性：提供參考凍干工藝，助力凍干流程；不需要額外添加凍干保護劑，可直接用于凍干

 

部分數(shù)據(jù)展示

儀器	7500	體系	25 μL
模板	假病毒	模板濃度	105、104、103 copies/mL
程序	50°C 10 min；95°C 5 min；45 cycles (95°C 15sec；60°C 15sec)

 

圖. 13775液體性能：對假病毒模板分別使用高靈敏度版RT-qPCR試劑13110（紅色）和13775（藍色）試劑進行多重RT-qPCR擴增，左為FAM通道，右為VIC通道。

圖. 13775液體試劑熱穩(wěn)定性37℃ 5 Days：將13775液體試劑置于37℃（綠色）和-20℃（藍色）條件下5天，進行多重RT-qPCR擴增測試，左為FAM通道，右為VIC通道。

 

圖. 13775產(chǎn)品凍干后性能：對假病毒模板分別使用液體試劑（紅色）和13775凍干粉（紫紅色）進行多重RT-qPCR擴增，左為FAM通道，右為VIC通道。結(jié)果表明，凍干后13775試劑活性完好，且依然具有高效多重反應(yīng)能力。

 

圖. 13775凍干粉熱穩(wěn)定性—37℃ 21 Days：將13775凍干粉置于37℃（綠色）和-20℃（藍色）條件下21天，進行多重RT-qPCR擴增測試，左為FAM通道，右為VIC通道。結(jié)果表明，凍干粉在37℃放置21天后，仍有良好的擴增效果。