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          首頁 / 細胞培養(yǎng) / 產(chǎn)品應用詳情
           
          干細胞分離與培養(yǎng)
           
          骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）在特定誘導條件下可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等細胞譜系。由于BMSCs易于分離和保存，免疫原性低、腫瘤風險低、倫理爭議小等優(yōu)勢，其在細胞治療和再生醫(yī)學領域表現(xiàn)廣闊的應用價值。今天小翌就來給大家分享BMSCs相關知識。

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          ▲ 圖源pixabay

          BMSCs細胞分離方法

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          差速貼壁法
          概念：利用了BMSCs與骨髓中其他細胞的貼壁性能差異及酶消化敏感性差異而逐步達到純化擴增
          優(yōu)點：快速、簡單、經(jīng)濟
          缺點：細胞純度相對不高
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          密度梯度離心法
          概念：針對骨髓中不同細胞的大小和密度差異進行分選。
          優(yōu)點：非常經(jīng)濟
          缺點：分選的細胞特異性有限，操作較難掌握
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          流式細胞熒光分選法( FACS)
          概念：基于細胞表面標志物的分選方式主要通過特異性識別BMSCs上的表面抗原而針對性篩選出目的細胞
          優(yōu)點：分選所獲細胞的純度更高，也可以同時對多個表面標志物乃至細胞內(nèi)標準物進行識別
          缺點：操作較復雜，對實驗要求高，價格昂貴，細胞通量低而分選時間長，對細胞活性影響相對較大
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          免疫磁珠分選法( MACS)
          概念：基于細胞表面標志物的分選方式主要通過特異性識別BMSCs上的表面抗原而針對性篩選出目的細胞
          優(yōu)點：操作簡單而快速，細胞通量高，成本相對低，對細胞活性影響低
          缺點：無法同時標記兩個或多個生物標志物

          BMSCs細胞鑒定

          ? 在體外標準培養(yǎng)條件下，細胞必須是呈梭形形態(tài)的黏附細胞。
          ? 通過流式細胞術檢測，細胞表面抗原表達CD105，CD73和CD90必須≥95%，同時表達CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α，或CD19和HLA － DＲ必須≤2%。
          ? 細胞在標準體外分化條件下能夠分化為成骨細胞、脂肪細胞和成軟骨細胞。

          BMSCs細胞培養(yǎng)
          培養(yǎng)的難點在于保持細胞活性，不同種屬來源的BMSCs在體外培養(yǎng)擴增方法基本相似，但是細微的營養(yǎng)條件、培養(yǎng)環(huán)境等差異都將會對細胞性能產(chǎn)生影響。

          ▍ 培養(yǎng)條件

          培養(yǎng)條件
          胎牛血清
          同源性血清，多為10%
          培養(yǎng)基
          90%高糖DMEM
          生長因子
          人血清、血漿、血小板衍生生長因子、TGF-β1、IGF等
          谷氨酰胺
          在低糖低氧培養(yǎng)而又所需能量比較高時，可以作為BMSCs生長的補充能量來源
          空氣條件
          5% CO2，95% AIR
          支原體檢測試劑
          檢測是否有支原體污染

          ▍ 消化、傳代、凍存

          接種密度
          2000～5000個/ cm2
          消化
          一般貼壁細胞可使用Accutase細胞消化液
          凍存液
          培養(yǎng)基50%、血清40%、DMSO 10%



          在細胞分離、鑒定、培養(yǎng)過程中，需要注意細胞是否受到支原體污染，支原體污染發(fā)生的頻率很高，但常常被研究者忽視，原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象，這就導致了很難被肉眼所觀察到。被支原體污染的細胞生長變慢、狀態(tài)變差，雖不會馬上致死，但會影響其機體內(nèi)的各種參數(shù)。

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          ▲ 圖2.一步法支原體檢測操作流程
          ▍ 結(jié)果是陽性，別怕！Yeasen 40607 幫你搞定
          MycAway? 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細胞無傷害，最大程度上挽救您的細胞，減少因支原體污染帶來的損失。
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          去除前
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          去除后
          ▲ 圖3.Yeasen MycAway? 支原體去除效果的展示

          ▍  支原體去除試劑的特點
          ? 毒性低：對細胞毒性小，不影響后續(xù)細胞實驗，如細胞活力檢測和細胞轉(zhuǎn)染等；
          ? 穩(wěn)定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效用；
          ? 操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
          ? 起效快：最快3天即可見效；
          ? 去除范圍廣：能去除實驗室絕大多數(shù)支原體類型。          
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          ▲ 圖4.支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示

          產(chǎn)品信息

          類別
          產(chǎn)品
          貨號
          規(guī)格
          支原體檢測
          GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR
          支原體檢測試劑盒
          40601ES10/20
          10/20 assays
          MycAway? Plus-Color?One-Step Mycoplasma Detection Kit?
          一步法快速支原體檢測試劑盒
          40612ES25/60
          25/100T
          支原體去除試劑
          MycAway? Spray (Ready-to-use) ?
          支原體噴霧劑（即用型）
          40605ES02/03
          1 / 2×500 mL
          MycAway? Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent ?
          MycAway??支原體去除試劑（1000×）
          40607ES03/08
          1/ 5×1mL
          支原體預防試劑
          MycAway? Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention 
          MycAway? 支原體預防試劑（2000×）
          40608ES03/08
          1/5×1 mL
          MycGuard?-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 
          細胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士
          40609ES60
          100 mL
          MycGuard?-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath?
          水浴鍋2號消毒衛(wèi)士
          40610ES60
          100 mL


           
           
           
           
           
           
           
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