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概述
▲ 圖1.原代組織細(xì)胞培養(yǎng)（源于網(wǎng)絡(luò)）
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特性 |
原代細(xì)胞 |
細(xì)胞系 |
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增殖能力 |
較弱 |
強(qiáng) |
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繁殖代數(shù) |
一般只能傳10代以?xún)?nèi) |
無(wú)限增殖，50代左右 |
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遺傳物質(zhì)完整性 |
遺傳物質(zhì)未改變 |
遺傳物質(zhì)發(fā)生改變 |
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生物特性 |
最接近臨床樣本 |
偏離臨床樣本 |
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培養(yǎng)容易程度 |
比較復(fù)雜 |
簡(jiǎn)單，易操作 |
在原代細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，支原體污染發(fā)生的頻率很高，但常常為人所忽視，原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象，這就導(dǎo)致了很難被肉眼所觀察到。
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原代細(xì)胞培養(yǎng)如何取材
▍ 皮膚和黏膜
主要取皮片，面積一般2-4cm2
» 無(wú)菌環(huán)境；
» 熟悉所需組織的類(lèi)型和部位；
» 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。
▍ 血液細(xì)胞
» 取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。
▍ 骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞
▍ 動(dòng)物組織取材-鼠胚組織
» 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動(dòng)物；
» 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢，切開(kāi)皮膚；
» 用無(wú)菌操作法解剖取胚。
▍ 動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺
» 腹部朝上固定在木板上，先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè)；
» 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺，或從背部打開(kāi)腹腔取腎。
▍ 雞、鴨、鳥(niǎo)類(lèi)胚胎組織
» 將胚蛋至于蛋架上，先將溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干，經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無(wú)菌條件下采用無(wú)菌法用剪刀或鑷子打開(kāi)氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；
» 用眼科鑷子撕去殼膜，暴露出雞胚；
» 用彎頭鑷挑起胚頭，取出胚胎，放入無(wú)菌平皿中，解剖取材。
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常見(jiàn)問(wèn)題
Q1：細(xì)胞量太少，長(zhǎng)不起來(lái)怎么辦？
有幾種辦法，如對(duì)沒(méi)消化完的組織塊反復(fù)消化，盡量多收集一些細(xì)胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少，應(yīng)耐心等待，盡量不要傳代，只換液。
Q2：皮膚組織作為正常組織，與腫瘤組織分離主要區(qū)別在哪里？
首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來(lái)；其次，在消化時(shí)，用的是胰酶，而非膠原酶，并且胰酶的濃度用的是0.05%，而不是0.25%。
Q3：細(xì)胞難以貼壁怎么辦？
為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁，可以提前1h將0.5%的明膠鋪于培養(yǎng)板。另外，如果細(xì)胞被污染了肯定不貼壁，建議做支原體檢測(cè)，結(jié)果如果是陽(yáng)性，立即加入支原體去除試劑，挽救您的細(xì)胞，咱們小翌可以為你的細(xì)胞提供全方位的護(hù)航！
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精品推薦
▍ Yeasen 40612 只要一步法即可檢測(cè)支原體的存在
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▍ 支原體去除試劑的特點(diǎn)
» 穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存并保持高效用；
» 操作簡(jiǎn)單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；
» 起效快：最快3天即可見(jiàn)效；
▲ 圖4.支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測(cè)圖示
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產(chǎn)品信息
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類(lèi)別 |
產(chǎn)品 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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支原體檢測(cè) |
40601ES10/20 |
10/20 assays |
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MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測(cè)試劑盒 |
40612ES25/60 |
25/100T |
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支原體 |
40605ES02/03 |
1 / 2×500 mL |
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MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×） |
40607ES03/08 |
1/ 5×1mL |
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支原體 |
MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×） |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
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40609ES60 |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath |
40610ES60 |
100 mL |
