產(chǎn)品描述
 

本產(chǎn)品適用于多重PCR實(shí)驗(yàn)。Hieff^® Multiplex PCR Kit以多重PCR酶制劑與2×擴(kuò)增緩沖液為組分的試劑盒，可快速便捷地用于PCR反應(yīng)，具備高均一性、高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)，可以對(duì)20對(duì)及以上的引物特異、均一地進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

產(chǎn)品組分
 

組分編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		13279ES60 (100 T)	13279ES76 (500 T)
13279-A	Hieff® Multiplex PCR Enzyme	100 μL	500 μL
13279-B	2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	2×1.25 mL	10×1.25 mL

【注】:13279-A組分避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸與保存
 

冰袋運(yùn)輸。-20℃儲(chǔ)存，有效期1年。

反應(yīng)體系
 

組分	體積 (μL)	終濃度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板DNA	DNA總量：1 ng-200 ng	-
無菌超純水	up to 50	-

【注】 1）上表中DNA量和引物濃度均為推薦濃度，可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整最適濃度。

 2）每條引物的濃度可在0.1 μM-0.5 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。

 3）2×Hieff^® Multiplex PCR Buffer中已經(jīng)包含擴(kuò)增所需要的Mg²⁺、dNTP、鹽離子等，無需額外添加。

擴(kuò)增程序
 

循環(huán)步驟	溫度（℃）	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94	1 min	1
變性	94	30 sec	15-45
退火	50-60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

【注】 1）在PCR儀上設(shè)置上表中的反應(yīng)程序進(jìn)行多重PCR反應(yīng)（設(shè)置熱蓋溫度至105℃左右）

       2）使用本產(chǎn)品獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物無需添加上樣緩沖液，可直接上樣用于電泳檢測(cè)。

       3）延伸時(shí)間以最長(zhǎng)擴(kuò)增片段為準(zhǔn)，可適當(dāng)延長(zhǎng)延伸時(shí)間，但要避免過長(zhǎng)時(shí)間帶來的非特異性擴(kuò)增。

實(shí)驗(yàn)案例分享
 

以人基因組DNA為模板，使用10對(duì)引物進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，分別擴(kuò)增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。

反應(yīng)體系配制
 

組分	體積 (μL)	終濃度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	10	0.1 μM
模板DNA	1	2 ng/μL
無菌超純水	up to 50	-

擴(kuò)增程序
 

循環(huán)步驟	溫度（℃）	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94	1 min	1
變性	94	30 sec	35
退火	60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

電泳檢測(cè)
 

2%瓊脂糖凝膠；電壓130 V；電泳時(shí)間30 min。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果
 

M：100 bp DNA ladder
Lane1-2：10重PCR產(chǎn)物
 

HB200511