產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格	價格（元）
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）	13278ES60	100 T	875.00
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）	13278ES76	500 T	3165.00

產(chǎn)品描述
 

本產(chǎn)品適用于多重PCR實驗。Hieff^® Multiplex PCR Kit（Mg²⁺ free）由多重PCR酶制劑與不含Mg²⁺的2×擴增緩沖液組成，在進行擴增反應(yīng)時，可在反應(yīng)體系中根據(jù)需求添加適量Mg²⁺。該產(chǎn)品的擴增具有高均一性、高特異性和高靈敏度的特點，可以對20對及以上引物體系進行特異、均一的擴增反應(yīng)。

產(chǎn)品組分
 

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		13278ES60 (100T)	13278ES76 (500T)
13278-A	Hieff® Multiplex PCR Enzyme	100 μL	500 μL
13278-B	2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	2×1.25 mL	10×1.25 mL
13278-C	MgCl2 (25 mM)	1×600 μL	3×1 mL

【注】:13278-A組分避免反復(fù)凍融。

運輸與保存方式
 

冰袋運輸。-20℃儲存，有效期1年。

反應(yīng)體系
 

組分	體積 (μL)	終濃度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板DNA	DNA總量：1 ng-200 ng	-
MgCl2（25 mM）	y	1-5 mM
無菌超純水	up to 50	-

【注】:
1）DNA量和引物濃度均為推薦起始投入量和濃度，可根據(jù)具體實驗情況進行調(diào)整，選擇最適投入量和濃度；
2）引物濃度：建議每條引物的濃度在0.1 μM-0.5 μM參考范圍內(nèi)進行調(diào)整；      
3）Hieff^® Multiplex PCR Buffer（Mg²⁺ free）中已經(jīng)包含擴增所需要的dNTP、鹽離子等，但不包含Mg²⁺，需在反應(yīng)體系中根據(jù)實驗需求添加適量Mg²⁺。

     

擴增程序
 

循環(huán)步驟	溫度（℃）	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94	1 min	1
變性	94	30 sec	15-45
退火	50-60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

【注】:
1）在PCR儀上設(shè)置上表中的反應(yīng)程序進行多重PCR反應(yīng)（設(shè)置熱蓋溫度至105℃左右）

2）使用本產(chǎn)品獲得的擴增產(chǎn)物需添加Loading buffer后用于電泳檢測。

3）延伸時間以最長擴增片段為準，可適當(dāng)延長延伸時間，但要避免過長時間帶來的非特異性擴增。

實驗案例分享
 

以人基因組DNA為模板，使用10對引物進行多重PCR反應(yīng)，分別擴增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。

擴增體系配制			擴增程序設(shè)置
組分	體積	終濃度		循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	25 μL	1×		預(yù)變性	94℃	1 min	1
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1 μL	-		變性	94℃	30 sec	35
Primer mix	10 μL	0.1 μM-0.5 μM		退火	60℃	60 sec
模板DNA（100 ng/μL）	1 μL	2 ng/μL		延伸	72℃	60 sec
MgCl2（25 mM）	5 μL	2.5 mM		終延伸	72℃	10 min	1
無菌超純水	to 50 μL	-

電泳檢測
 

2%瓊脂糖凝膠；130 V；電泳時間1 h。

實驗結(jié)果
 

Lane 1：100bp DNA marker
Lane 2-3：10重PCR產(chǎn)物

 

 

 

HB200512