產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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YSFluorTM 488 NHS Ester (Succinimidyl Ester) Alexa Fluor 488-N-羥基琥珀酰亞胺酯 |
40779ES03 |
1 mg |
2768.00 |
產(chǎn)品描述
YSFluorTM 488是一種亮綠色熒光染料，具有水溶性和較強的pH穩(wěn)定性（pH4-10），可被488 nm激發(fā)產(chǎn)生信號穩(wěn)定的熒光，常作為一種細(xì)胞標(biāo)記物偶聯(lián)到抗體、多肽、蛋白、示蹤劑和其他底物上廣泛用于細(xì)胞成像和檢測。
YSFluorTM 488 NHS Ester，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團的Alexa Fluor 488，可直接與生化分子上的氨基（-NH2）反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵，主要是伯胺，可用于標(biāo)記任何含伯胺的蛋白、多肽、氨基修飾的寡核苷酸或者其他含氨基的生物分子。
產(chǎn)品性質(zhì)
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熒光團（Fluorophore Label） |
YSFluorTM 488 dye |
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活性基團（Reactive Group） |
NHS ester |
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反應(yīng)性（Reactivity） |
伯胺（R-NH2） |
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分子式（Molecular Formula） |
C25H15Li2N3O13S2 |
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分子量（Molecular Weight） |
643.4 |
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外觀（Appearance） |
粉末 |
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Ex/Em |
494/517 nm |
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摩爾吸光系數(shù)（Extinction Coefficient） |
71,000 cm-1M-1 |
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校正因子（CF280） |
0.11 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃干燥避光保存，有效期6個月。
注意事項
1）NHS ester基團對濕度非常敏感，務(wù)必干燥保存產(chǎn)品。使用前產(chǎn)品需放到室溫回溫至少20 min。
2）NHS ester基團的水解發(fā)生在水溶性緩沖體系屬于競爭性反應(yīng)。對蛋白/多肽伯胺的連接反應(yīng)建議在pH 7-9范圍內(nèi)進行。
3）不要使用任何含伯胺的緩沖液，比如Tris，甘氨酸、銨鹽、或其他穩(wěn)定蛋白如BSA等。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
標(biāo)記方法（以IgG為例）
【注意】：該染料可標(biāo)記任何蛋白，此方案是以IgG為例進行優(yōu)化的，可根據(jù)需要按照該方案調(diào)整合適的體系。
1. 用1ml不含氨基的合適的緩沖液（eg.100 mM碳酸氫鈉緩沖液）充分溶解約10 mg蛋白。
【注】：① 標(biāo)記的效果具有濃度依賴性，當(dāng)濃度低于2 mg/mL，會嚴(yán)重影響標(biāo)記效率，標(biāo)記蛋白濃度需控制在2-20 mg/mL。
② 標(biāo)記體系應(yīng)避免任何含氨基的底物，如Tris、glycine、銨鹽、或其他穩(wěn)定蛋白如BSA等，如待標(biāo)記的蛋白溶液中含有上述物質(zhì)的污染，則需透析到10-20 mM的磷酸鹽緩沖液（PBS）中，再向每毫升蛋白溶液中加入0.1 mL 1M碳酸氫鹽緩沖液(pH 8.3–9.0)調(diào)至所需pH值。
③ 抗體溶液中存在的微量疊氮鈉（＜3 mM）或硫汞撒（＜1 mM）不會干擾標(biāo)記反應(yīng)。
2. 使用前用高質(zhì)量無水DMSO溶解Alexa Fluor 488-NHS至10 mg/mL。
【注】：Alexa Fluor 488-NHS雖然具有水溶性，但是在水溶液中，會被水解成非活性游離酸。因此一旦溶解，該染料活性就可能減弱，尤其是在水溶液中，本品就會變得很不穩(wěn)定。
3. 向蛋白樣品中緩慢加入50-100 µL Alexa Fluor488-NHS試劑，充分混勻。
【注】：加入Alexa Fluor488-NHS試劑的量在0.5-1 mg。不同的蛋白和標(biāo)記試劑的標(biāo)記效果不同，請根據(jù)具體情況優(yōu)化染料與蛋白的比例。
4. 邊攪拌邊于室溫孵育60 min（或更長）；
5. 利用合適介質(zhì)去除未反應(yīng)的試劑；
6. 測定YSFluorTM 488-蛋白標(biāo)記效率（DOL）和標(biāo)記濃度。
① 測定A280和A494：利用1 cm路徑的比色皿檢測標(biāo)記物在280 nm和494 nm的吸光值，此處可根據(jù)需要對樣品進行稀釋。
② 計算樣品中蛋白的濃度：
HB240313
